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fortunate1

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增+【有效期至2008.9.7】

我在做PCR扩增时,扩增的电泳图只有二聚体并且二聚体的条带很亮,没有其它任何条带,是什么原因那?我想扩增的目的条带是1500bp左右,我设计的上游引物的Tm值是66.6,下游引物的Tm值是55,设定的退火温度是54度,延伸时间是1分30秒。请各位前辈指教,多谢!

[ Last edited by fortunate1 on 2008-9-6 at 21:34 ]
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ant5002

可能是 延伸时间不够吧!  其实我也不太清楚的!  呵呵!
2楼2008-08-31 10:00:19
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zhangjunem

至尊木虫 (职业作家)

建议适用高保真Taq酶,保证DNA模板没问题,延伸时间要延长
3楼2008-08-31 10:11:28
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zwlcxx

银虫 (小有名气)


fortunate1(金币+1,VIP+0):非常感谢,谢谢你
建议退火温度更改为58-60度之间的值,提高Mg2+浓度,以提高扩增的特异性。考虑降低引物的量,和增加模板量。
4楼2008-09-01 17:07:20
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

可能的原因可能是多方面的

除了上述大家说的建议
另外建议看看引物的设计是否有问题?
不知道你的模板是什么,你能确信扩增到的是二聚体而不是别的序列吗?可以测个序,或者做个酶切验证一下。
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2008-09-04 13:46:54
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yuyixst

木虫 (正式写手)

遇到这样的问题有很多原因的吧,引物,模板,还有就是你的PCR程序设置的摸索,多做几次,就有可能扩出来了,再说了,都不知道你的引物是否能够匹配
6楼2008-09-05 15:20:09
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