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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » PCR扩增+【有效期至2008.9.7】
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fortunate1

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增+【有效期至2008.9.7】

我在做PCR扩增时，扩增的电泳图只有二聚体并且二聚体的条带很亮，没有其它任何条带，是什么原因那？我想扩增的目的条带是1500bp左右，我设计的上游引物的Tm值是66.6，下游引物的Tm值是55，设定的退火温度是54度，延伸时间是1分30秒。请各位前辈指教，多谢！

[ Last edited by fortunate1 on 2008-9-6 at 21:34 ]
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1楼 2008-08-31 09:41:33
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ant5002

可能是 延伸时间不够吧!  其实我也不太清楚的!  呵呵!
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2楼2008-08-31 10:00:19
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zhangjunem

至尊木虫 (职业作家)
建议适用高保真Taq酶，保证DNA模板没问题，延伸时间要延长
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3楼2008-08-31 10:11:28
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zwlcxx

银虫 (小有名气)
★
fortunate1(金币+1,VIP+0):非常感谢，谢谢你
建议退火温度更改为58－60度之间的值，提高Mg2+浓度，以提高扩增的特异性。考虑降低引物的量，和增加模板量。
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4楼2008-09-01 17:07:20
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)
可能的原因可能是多方面的

除了上述大家说的建议
另外建议看看引物的设计是否有问题？
不知道你的模板是什么，你能确信扩增到的是二聚体而不是别的序列吗？可以测个序，或者做个酶切验证一下。
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2008-09-04 13:46:54
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yuyixst

木虫 (正式写手)
遇到这样的问题有很多原因的吧，引物，模板，还有就是你的PCR程序设置的摸索，多做几次，就有可能扩出来了，再说了，都不知道你的引物是否能够匹配
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6楼2008-09-05 15:20:09
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