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惠子934

木虫 (正式写手)

[交流] 双酶切载体切不动 已有2人参与

酶切质粒,7995bp SamI 和BamH I 双酶切质粒,20ul体系,酶都是0.5ul,10xbuffer和0.15%BSA的各10u,质粒5ul (100ng/ul),切出来还是三条带
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惠子934

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:57:28
能否详细说一下你的三条带大致的bp数?上样的时候上一个没有酶切的质粒,看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样,如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外,我看了一下酶产品手册,没有找到Sam Ⅰ只 ...

7500下面一点,5000下面一点,2500下面一点,15000的mark

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7楼2015-09-21 16:31:12
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反应链

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
三条带是指质粒的线性、环形和螺旋带型吗?单酶切的结果如何,能不能得到单一的线性带型。如果单酶切可以的话,可以考虑多用一些质粒,分步酶切。
2楼2015-09-21 13:36:37
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evil丶zero

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
能否详细说一下你的三条带大致的bp数?上样的时候上一个没有酶切的质粒,看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样,如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外,我看了一下酶产品手册,没有找到Sam Ⅰ只有Sma Ⅰ,如果酶切时间够了,你在看看怎么调整体系。实在不行就单切呗。
3楼2015-09-21 13:57:28
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惠子934

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-09-21 13:36:37
三条带是指质粒的线性、环形和螺旋带型吗?单酶切的结果如何,能不能得到单一的线性带型。如果单酶切可以的话,可以考虑多用一些质粒,分步酶切。

单酶切只做过一次,条带比较岸,不太确定。现在把质粒拿去测序了,想验证一下公司给的是否是我们要的,过两天再做一次单酶切吧

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4楼2015-09-21 15:24:21
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