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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切载体切不动
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惠子934

木虫 (正式写手)

[交流] 双酶切载体切不动 已有2人参与

酶切质粒，7995bp SamI 和BamH I 双酶切质粒，20ul体系，酶都是0.5ul，10xbuffer和0.15%BSA的各10u，质粒5ul (100ng/ul),切出来还是三条带
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1楼 2015-09-21 10:11:23
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反应链

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
三条带是指质粒的线性、环形和螺旋带型吗？单酶切的结果如何，能不能得到单一的线性带型。如果单酶切可以的话，可以考虑多用一些质粒，分步酶切。
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2楼2015-09-21 13:36:37
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能否详细说一下你的三条带大致的bp数？上样的时候上一个没有酶切的质粒，看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样，如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外，我看了一下酶产品手册，没有找到Sam Ⅰ只有Sma Ⅰ，如果酶切时间够了，你在看看怎么调整体系。实在不行就单切呗。
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3楼2015-09-21 13:57:28
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惠子934

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-09-21 13:36:37
三条带是指质粒的线性、环形和螺旋带型吗？单酶切的结果如何，能不能得到单一的线性带型。如果单酶切可以的话，可以考虑多用一些质粒，分步酶切。

单酶切只做过一次，条带比较岸，不太确定。现在把质粒拿去测序了，想验证一下公司给的是否是我们要的，过两天再做一次单酶切吧

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4楼2015-09-21 15:24:21
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惠子934

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:57:28
能否详细说一下你的三条带大致的bp数？上样的时候上一个没有酶切的质粒，看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样，如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外，我看了一下酶产品手册，没有找到Sam Ⅰ只 ...

没切过的是三条，切过的是两条，对应着

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5楼2015-09-21 16:27:21
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惠子934

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:57:28
能否详细说一下你的三条带大致的bp数？上样的时候上一个没有酶切的质粒，看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样，如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外，我看了一下酶产品手册，没有找到Sam Ⅰ只 ...

酶切过夜了。确实是smaI,单酶切用的是另外一个，因为这个是平末端

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6楼2015-09-21 16:28:36
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惠子934

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:57:28
能否详细说一下你的三条带大致的bp数？上样的时候上一个没有酶切的质粒，看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样，如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外，我看了一下酶产品手册，没有找到Sam Ⅰ只 ...

7500下面一点，5000下面一点，2500下面一点，15000的mark

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7楼2015-09-21 16:31:12
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惠子934

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:57:28
能否详细说一下你的三条带大致的bp数？上样的时候上一个没有酶切的质粒，看看这三条带中有没有可能有一条和没有切过的质粒一样，如果有那么就说明你的酶切时间不够。
另外，我看了一下酶产品手册，没有找到Sam Ⅰ只 ...

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惠子934
8楼2015-09-21 16:43:30
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惠子934

木虫 (正式写手)
第二个孔是双酶切，最后一个孔是对照  中间是做的双酶切胶回收
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9楼2015-09-21 16:44:19
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惠子934

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 惠子934 at 2015-09-21 16:43:30
http://muchongimg.xmcimg.com/data/weixin/cb/e2/3b401ebe3fa702ecbe2b1cbfe02798a6.jpg...

第二个孔是双酶切，最后一个孔是对照  中间是做的双酶切胶回收
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10楼2015-09-21 16:44:50
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