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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：大肠杆菌转化问题
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水草

[交流] 求助：大肠杆菌转化问题

我往大肠杆菌中转化12000bp的连接产物，km抗性，一般过夜都不长，第二三天才有菌落，我摇了10几个，什么都没摇起来，怎么回事呢？连接产物电泳了，好像有带，虽然看起来像载体自连。我该怎么办？

我的感受态没有问题，我用12000的质粒试过了，1微升就涨满板。

[ Last edited by 水草 on 2008-8-31 at 21:04 ]
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1楼 2008-08-30 20:31:45
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
水草(金币+1,VIP+0):15000都有转进去的。
外源片度太大了 再说你的感受态是不是有问题 16个小时不长 以后长的可能都是杂菌所以摇不起来
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2楼2008-08-31 11:29:52
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lipishun

金虫 (小有名气)
★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢！
链接产物不大，可以尝试电转化！而且你做的感受态细胞估计不合格！没有达到要求！超过16或20小时的，一般都是无抗性的空E.coli。
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3楼2008-08-31 13:17:15
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jfl315

木虫 (小有名气)
你确认没有km抗性吗！！！
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4楼2008-08-31 13:30:47
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
水草(金币+3,VIP+0):感谢！但我为什么连不上？都纯化了。
肯定是没有连上,一般过夜就能看到菌落的.
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5楼2008-08-31 13:35:50
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lipishun

金虫 (小有名气)
★ ★
水草(金币+2,VIP+0):我们换PROMEGA公司的了，似乎连上了，我要提质粒了！
请问你用的是什么公司的连接酶啊？ 我觉得用PROMEGA公司的不错，虽然贵点。
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6楼2008-09-03 15:34:16
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renyjzx2008

金虫 (小有名气)
★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢！
肯定是没有连上，你可以考虑酶切是不是切开，插入片段与质粒DNA的比例应该用不同的比例在做一试验，还有就是连接酶有没有问题。祝好运，早日解决问题！！
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7楼2008-09-03 16:41:58
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nijunzju

银虫 (小有名气)
★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢！
连接产物跑电泳是没有意义的，因为一般连上的质粒占的比例很小，看不见的。看到的都是连接前的片段。
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8楼2008-09-03 17:07:48
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