24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 984  |  回复: 7
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 水草 的 8 个金币

水草

[交流] 求助:大肠杆菌转化问题

我往大肠杆菌中转化12000bp的连接产物,km抗性,一般过夜都不长,第二三天才有菌落,我摇了10几个,什么都没摇起来,怎么回事呢?连接产物电泳了,好像有带,虽然看起来像载体自连。我该怎么办?

我的感受态没有问题,我用12000的质粒试过了,1微升就涨满板。

[ Last edited by 水草 on 2008-8-31 at 21:04 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


水草(金币+1,VIP+0):15000都有转进去的。
外源片度太大了 再说你的感受态是不是有问题 16个小时不长 以后长的可能都是杂菌所以摇不起来
2楼2008-08-31 11:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)

★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢!
链接产物不大,可以尝试电转化!而且你做的感受态细胞估计不合格!没有达到要求!超过16或20小时的,一般都是无抗性的空E.coli。
3楼2008-08-31 13:17:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jfl315

木虫 (小有名气)

你确认没有km抗性吗!!!
4楼2008-08-31 13:30:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
水草(金币+3,VIP+0):感谢!但我为什么连不上?都纯化了。
肯定是没有连上,一般过夜就能看到菌落的.
5楼2008-08-31 13:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)

★ ★
水草(金币+2,VIP+0):我们换PROMEGA公司的了,似乎连上了,我要提质粒了!
请问你用的是什么公司的连接酶啊? 我觉得用PROMEGA公司的不错,虽然贵点。
6楼2008-09-03 15:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyjzx2008

金虫 (小有名气)

★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢!
肯定是没有连上,你可以考虑酶切是不是切开,插入片段与质粒DNA的比例应该用不同的比例在做一试验,还有就是连接酶有没有问题。祝好运,早日解决问题!!
7楼2008-09-03 16:41:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nijunzju

银虫 (小有名气)

★ ★
水草(金币+2,VIP+0):谢谢!
连接产物跑电泳是没有意义的,因为一般连上的质粒占的比例很小,看不见的。看到的都是连接前的片段。
8楼2008-09-03 17:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水草 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +7 曼111 2026-03-24 8/400 2026-03-27 13:53 by 杨杨杨紫
[考研] 287求调剂 +8 land xuxu 2026-03-26 8/400 2026-03-27 13:15 by lature00
[考研] 266求调剂 +7 阳阳哇塞 2026-03-27 8/400 2026-03-27 13:04 by zzll406
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 299求调剂 +8 shxchem 2026-03-20 10/500 2026-03-27 11:27 by sanrepian
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +3 辰沐5211314 2026-03-26 3/150 2026-03-27 10:24 by 尽舜尧1
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +8 y7czhao 2026-03-26 8/400 2026-03-26 19:51 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见