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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助：DNA浓度太低，电泳无条带，无法做酶切
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
自在昆明: 金币+5, ★有帮助 2015-09-26 17:18:47
不知道你用什么方法提，如果浓度不高就别用试剂盒了，试试搅丝法，浓度可能高些。另外，常温效果不好就4度提取试试看。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2015-09-21 20:44:54
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自在昆明

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 果小胖子 at 2015-09-21 16:12:07
提高DNA的含量是最为必要的一点，你可能需要再摸索一下提取DNA的方法了，优化一下每一个试剂的量的多少

谢谢

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12楼2015-09-26 17:18:11
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自在昆明

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2015-09-21 20:44:54
不知道你用什么方法提，如果浓度不高就别用试剂盒了，试试搅丝法，浓度可能高些。另外，常温效果不好就4度提取试试看。

谢谢，已经解决

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13楼2015-09-26 17:18:32
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大brain

银虫 (小有名气)
怎么解决的啊，让我们也参考一下，怎么提真菌的dna

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态度很重要
14楼2015-09-26 23:04:11
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果小胖子

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

多次提取DNA之后，富集到一起后再进行后续实验。DNA含量低是不是和你提取的真菌所处的生长时期有关，最好在进行DNA提取之前也进行一下OD值得检测，当然是真菌大多数处于对数生长期的时候是最好的。祝好
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15楼2015-09-27 17:49:12
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
可以换营养丰富的培养基过夜培养提。

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16楼2015-09-27 22:53:37
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谢婷婷

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 自在昆明 at 2015-09-19 21:07:27
mix是什么？
...

传统的pcr体系中有dna模版，上下游引物，酶,dntps以及水，现在有很多的厂家出的mix是酶和dntps的混合物

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17楼2015-09-28 00:31:07
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dorecnu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

真菌DNA提取的关键在于菌体要裂解完全，所以裂解菌体是需要优化的关键环节，通常情况下我们会用液氮充分研磨真菌细胞样品再上相关的试剂盒，如果效果还不理想，建议购买进口DNA提取试剂盒，按试剂盒使用要求提取DNA。另外，楼主说能满足测序，电泳不出条带。电泳不出条带的DNA也敢拿去测序？DNA测序仪品控都不做？测序结果能信？
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18楼2015-09-28 09:33:55
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自在昆明

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by dorecnu at 2015-09-28 09:33:55
真菌DNA提取的关键在于菌体要裂解完全，所以裂解菌体是需要优化的关键环节，通常情况下我们会用液氮充分研磨真菌细胞样品再上相关的试剂盒，如果效果还不理想，建议购买进口DNA提取试剂盒，按试剂盒使用要求提取DNA ...

谢谢您的回复！明天再从头做一次！

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19楼2015-11-20 23:49:18
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shx0743

新虫 (正式写手)
你可以先把之前提的重新沉淀，少溶点水，上样看看你DNA的质量，好方便你改进提取中的问题！

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20楼2015-11-22 07:37:46
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