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变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（配方见下详细说明）在4度会结冰了！ 已有4人参与
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变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（高浓度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度会结冰了！ 变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（高浓度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度会结冰了！ 蛋白高浓度尿素将蛋白变性后，与Ni柱binding后，需要洗脱，洗脱的Elute配方为：高浓度尿素，500mM咪唑，100mM NaCI，10%甘油，50mMTris-HCI PH8，。配好后的缓冲液放在4度，居然结冰了？求大神解释原因？ buffer结冰了，对蛋白肯定有影响啊，虽然是已经变性了的。 求各位帮帮忙，大神解释一下。 |
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【答案】应助回帖
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我是室温纯化的。而且用的是磁珠法。操作比较快速。问题是你认为洗脱液结冰是尿素的问题吗 你可以验证一下。洗脱液不加尿素洗脱是否结冰 ，还有我不知道你后续想做什么.尿素只是帮助维持蛋白的变性状态 并不影响蛋白的洗脱，你可以继续后续实验试试。还有为什么要变性两次呢。如果胍盐不结冰 两次变性都用胍盐不也一样吗。我一般上午将样用尿素处理后放冰箱里 下午再进行纯化 完全没有异常。可能你在冰上操作温度太低 时间又太久吗。我确实没遇到过这问题。 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2015-10-17 10:49:55
2楼2015-09-21 11:12:47
乔丹希尔
金虫 (著名写手)
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3楼2015-09-21 11:53:32
4楼2015-09-24 15:59:02