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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（配方见下详细说明）在4度会结冰了！
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哇哈哈lx

铜虫 (初入文坛)

[求助] 变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（配方见下详细说明）在4度会结冰了！ 已有4人参与

变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（高浓度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度会结冰了！
变复性Ni柱纯化蛋白，洗脱液（高浓度尿素，500mM咪唑，100mMNaCI，10%甘油，50Tris）在4度会结冰了！
蛋白高浓度尿素将蛋白变性后，与Ni柱binding后，需要洗脱，洗脱的Elute配方为：高浓度尿素，500mM咪唑，100mM NaCI，10%甘油，50mMTris-HCI PH8，。配好后的缓冲液放在4度，居然结冰了？求大神解释原因？
buffer结冰了，对蛋白肯定有影响啊，虽然是已经变性了的。
求各位帮帮忙，大神解释一下。
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1楼 2015-09-18 20:31:24
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haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那不是结冰，是高浓度的尿素很溶液就会析出，你放常温下让它重新溶解就可以了
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生物你好
2楼2015-09-21 11:12:47
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乔丹希尔

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该不是结冰，只是析出了，看着像晶体一样的东西，仿佛是结冰啦
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愿结交更多志同道合的人一块前行！！
3楼2015-09-21 11:53:32
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bhl2012

银虫 (小有名气)
一般8M尿素就可以将包涵体溶解吧 在4度也没析出现象。你是用了多高浓度啊

发自小木虫IOS客户端
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4楼2015-09-24 15:59:02
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
哇哈哈lx: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2015-10-16 16:03:31
本帖内容被屏蔽
5楼2015-09-24 16:23:25
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哇哈哈lx

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-09-24 15:59:02
一般8M尿素就可以将包涵体溶解吧 在4度也没析出现象。你是用了多高浓度啊

我就是用的8M，放在冰上就结冰了 ，很快就结冰了。你是室温纯化还是冰上啊，我是冰上纯化。我做两个变复性，唯一不同是两种变性剂，盐酸胍和尿素。请问你是在室温纯化还是冰上纯化的啊？
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6楼2015-10-16 16:02:31
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是室温纯化的。而且用的是磁珠法。操作比较快速。问题是你认为洗脱液结冰是尿素的问题吗 你可以验证一下。洗脱液不加尿素洗脱是否结冰 ，还有我不知道你后续想做什么.尿素只是帮助维持蛋白的变性状态 并不影响蛋白的洗脱，你可以继续后续实验试试。还有为什么要变性两次呢。如果胍盐不结冰 两次变性都用胍盐不也一样吗。我一般上午将样用尿素处理后放冰箱里 下午再进行纯化 完全没有异常。可能你在冰上操作温度太低 时间又太久吗。我确实没遇到过这问题。

发自小木虫IOS客户端
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7楼2015-10-17 10:49:55
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