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斌猫斌喵喵

铁虫 (初入文坛)

[求助] 胃蛋白酶也是蛋白啊,为什么我SDS-PAGE做不出来? 已有2人参与

按理说是36 kDa分子量应该很好做的啊,但我做了一次,用了多种浓度的胃蛋白酶进样,只是进样量2000 ng以下似乎就看不到条带了,但用BSA测定染色极限时都是小于50 ng也能出现条带啊,是胃蛋白酶pH高了就分解吗?但分解产物总能够电泳出来吧?怎么也不至于ug级别的进样量就完全看不到条带了呢?

方法就是按常规SDS-PAGE的方法,分离胶时10%的。
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斌猫斌喵喵

铁虫 (初入文坛)

另外Native-PAGE也做了下,干脆就连条带都不出了,按理说胃蛋白酶pI这么低肯定带正电往下跑的啊,我用15%的胶片只通电20 min都看不到条带了,染色后槽里面也没有变深不知道都跑哪了。
2楼2015-09-17 14:51:27
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re-take

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你的running buffer出了问题,按理说SDS-PAGE中一般会使蛋白带负电荷,不知到你的胃蛋白酶是不是在这种PH下不稳定然后沉淀或降解了
船到桥头自然直
3楼2015-09-17 16:34:21
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该是降解了吧,胃蛋白酶很容易降解的,温度高一点就完蛋,你的样品是怎么来的,是直接提的,还是做得重组蛋白表达
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
4楼2015-09-22 11:20:42
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