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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 胃蛋白酶也是蛋白啊，为什么我SDS-PAGE做不出来？
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斌猫斌喵喵

铁虫 (初入文坛)

[求助] 胃蛋白酶也是蛋白啊，为什么我SDS-PAGE做不出来？ 已有2人参与

按理说是36 kDa分子量应该很好做的啊，但我做了一次，用了多种浓度的胃蛋白酶进样，只是进样量2000 ng以下似乎就看不到条带了，但用BSA测定染色极限时都是小于50 ng也能出现条带啊，是胃蛋白酶pH高了就分解吗？但分解产物总能够电泳出来吧？怎么也不至于ug级别的进样量就完全看不到条带了呢？

方法就是按常规SDS-PAGE的方法，分离胶时10%的。
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1楼 2015-09-17 14:25:19
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斌猫斌喵喵

铁虫 (初入文坛)
另外Native-PAGE也做了下，干脆就连条带都不出了，按理说胃蛋白酶pI这么低肯定带正电往下跑的啊，我用15%的胶片只通电20 min都看不到条带了，染色后槽里面也没有变深不知道都跑哪了。
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2楼2015-09-17 14:51:27
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re-take

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你的running buffer出了问题，按理说SDS-PAGE中一般会使蛋白带负电荷，不知到你的胃蛋白酶是不是在这种PH下不稳定然后沉淀或降解了
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船到桥头自然直
3楼2015-09-17 16:34:21
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该是降解了吧，胃蛋白酶很容易降解的，温度高一点就完蛋，你的样品是怎么来的，是直接提的，还是做得重组蛋白表达？
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-09-22 11:20:42
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