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Autum

新虫 (初入文坛)

[求助] 用WB能同时检测多种蛋白质,可行吗? 已有5人参与

各位大侠,没做过细胞实验的菜鸟我要开始做实验了,可是,还没试验就钻胡同了求各路大侠指点一二,感激不尽:

                    我需要在养细胞后测定细胞内四种蛋白质的含量,可以用western blot吗?如果用WB,是用传说中的跑出不同蛋白质
            后再将胶剪开,分别加抗体,这种方法吗?还是说有其他方法?
            
                                                                                                                                                     谢谢大侠们
                                                                                                                                                          菜鸟
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Autum: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-10 17:07:47
果真是菜鸟,哈哈,没事的
当然可以同时检测多种蛋白,不过是这样的,你要检测的蛋白是带同样的标签吗?因为WB就是根据蛋白带的标签才能和他结合,从而检测出蛋白(这点主要是WB的原理),如果你的四中是带同样的标签,就不需要剪开了,实验做到最后依然是一张完整的膜,如果不是带一样的标签,那就要剪膜,所以说在SDS PAGE上样的的时候就要注意了,带相同标签的点样要在一起,这样在抗体孵育的时候好剪膜,我们一般一抗二抗都是一起加孵育很正常,瞬时转染后的细胞产物还是比较好检测的~比一般的原核蛋白处理简单一点~好运
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-09-18 14:44:48
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pyc1990916

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是的,可以使用这种方法,祝你试验成功
2楼2015-09-17 17:14:49
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Autum

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pyc1990916 at 2015-09-17 17:14:49
是的,可以使用这种方法,祝你试验成功

谢谢您的回复。请问,用这种方法的话,最后maker条带是和其他条带分开的,怎么比较呢?又重新拼起来?
3楼2015-09-18 10:11:25
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
WB是定性检测的,应该不可以定量吧。你可以用SDS-PAGE染色看一下啊!
4楼2015-09-18 11:33:21
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