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用WB能同时检测多种蛋白质，可行吗？ 已有5人参与
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各位大侠，没做过细胞实验的菜鸟我要开始做实验了，可是，还没试验就钻胡同了 求各路大侠指点一二，感激不尽：我需要在养细胞后测定细胞内四种蛋白质的含量，可以用western blot吗？如果用WB，是用传说中的跑出不同蛋白质 后再将胶剪开，分别加抗体，这种方法吗？还是说有其他方法？ 谢谢大侠们 菜鸟 |
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4楼2015-09-18 11:33:21
【答案】应助回帖
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当然可以鉴别多种蛋白，属于半定量分析方法。跑胶后转膜，然后加一抗二抗检测第一种蛋白，曝光过后，洗几遍加另一种一抗和二抗，以此类推就可以 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2015-09-18 12:04:41
soarshining
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【答案】应助回帖
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如果是分子量不同能分开那就剪开，我们都是这么做的。你只要在膜上用铅笔或者别的做好标记，哪个条带是什么就行。marker作用本就只是分辨哪一个条带是啥。如果不能，那就只能跑几块胶，不推荐重新用，这没必要省，除非你样品太珍贵 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-09-18 12:14:35
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
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Autum: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-10 17:07:47
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Autum: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-10 17:07:47
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果真是菜鸟，哈哈，没事的 当然可以同时检测多种蛋白，不过是这样的，你要检测的蛋白是带同样的标签吗？因为WB就是根据蛋白带的标签才能和他结合，从而检测出蛋白（这点主要是WB的原理），如果你的四中是带同样的标签，就不需要剪开了，实验做到最后依然是一张完整的膜，如果不是带一样的标签，那就要剪膜，所以说在SDS PAGE上样的的时候就要注意了，带相同标签的点样要在一起，这样在抗体孵育的时候好剪膜，我们一般一抗二抗都是一起加孵育很正常，瞬时转染后的细胞产物还是比较好检测的~比一般的原核蛋白处理简单一点~好运 |
7楼2015-09-18 14:44:48
