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神奇的网站新虫 (初入文坛)
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[求助]
急急急：HPLC使用前中后相关问题请教，谢谢已有4人参与
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急急急向各大神求助： 我现在利用HPLC测面粉中的维生素B1、B2、B6和B9的含量，第一次接触HPLC有几个问题求教大神们： 1、测定的标准曲线单位是μg/ml，但最终论文中出现的应是μg/g，想问下这该怎么换算呢？文章中也没有提及如何换算，该怎么处理才好呢？ 2、测定维生素B6时需要使用离子对试剂（庚烷磺酸钠），测定维生素B9时需要使用离子对试剂（四丁基磷酸二氢铵），我的柱子是新柱子，请问使用离子对试剂是否对柱子有伤害？应该如何减少对柱子的损伤？在使用了离子对试剂的缓冲液与甲醇做流动相后，是否不能再使用该柱子测定不含离子对作为流动相的物质么？每次使用完后应该如何冲洗，冲洗多长时间才能确保将离子对冲出去？ 3、测定维生素B9时，需要用SPE进行萃取，我的SPE柱子是HYPERSEP C18 500MG/3ml 的，这个可以重复使用么？我查询了下说萃取分为四部：柱的活化和平衡、上样、冲洗和洗脱感兴趣的化合物，冲样是用一种强得能洗脱杂质而又弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质；洗脱是用溶剂将被吸附在萃取柱上的化合物洗脱在溶液里，也就是说上样后得到的液体和冲样得到的液体要丢弃掉，洗脱的液体留下是吧？ 如果大神们看到我的提问，求回复指导下，谢谢众大神。 [ Last edited by archbishop on 2015-9-16 at 20:59 ] |
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大神， 1、因为我的原材料是面粉，所以用Ppm的单位。我是想根据标准曲线找到浓度乘以进样体积，得到进样体积的质量，再根据比例看提取到了多少溶液换算的，我也不知道对不对。 2、那看到文献中说缓冲液中有少量离子对试剂，这个少量如何界定？我使用的是庚烷磺酸钠，但发现应该从sigma购买如图一左边的我买成了右边类型的，不知该怎么办 3、Spe是不是用针管来加压就可以呢，那个流速通过针管控制加样来控制呢 鞋过大神 期待你的回复  发自小木虫IOS客户端 |
7楼2015-09-17 11:01:42
2楼2015-09-16 22:19:40
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 金币+1 2015-09-16 23:19:52
感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 金币+1 2015-09-16 23:19:52
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1. 一般情况下 都会用ug/ml 为什么非要用 ug/g 2. 我分析用很多离子对， 一般用水相慢慢把离子对换出来。比如你的流动相是 离子对缓冲：甲醇（60:40）。 做完实验后慢慢换成 水：甲醇 60:40。 然后进行一般的柱子日常维护， 比如10%或20% 甲醇冲洗。 3. 一般不重复使用，a) 面粉中的大分子可能被吸附在柱子上很难洗脱，影响柱效。b）下一次洗脱B6中可能会引入杂质。 一般用TLC 检测是否目标化合物是否洗脱出来（洗脱顺序可以先用TLC 估量一下）。然后收集洗脱液，合并旋蒸。 |
3楼2015-09-16 22:34:13
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