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神奇的网站新虫 (初入文坛)
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[求助]
急急急：HPLC使用前中后相关问题请教，谢谢 已有4人参与
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急急急向各大神求助： 我现在利用HPLC测面粉中的维生素B1、B2、B6和B9的含量，第一次接触HPLC有几个问题求教大神们： 1、测定的标准曲线单位是μg/ml，但最终论文中出现的应是μg/g，想问下这该怎么换算呢？文章中也没有提及如何换算，该怎么处理才好呢？ 2、测定维生素B6时需要使用离子对试剂（庚烷磺酸钠），测定维生素B9时需要使用离子对试剂（四丁基磷酸二氢铵），我的柱子是新柱子，请问使用离子对试剂是否对柱子有伤害？应该如何减少对柱子的损伤？在使用了离子对试剂的缓冲液与甲醇做流动相后，是否不能再使用该柱子测定不含离子对作为流动相的物质么？每次使用完后应该如何冲洗，冲洗多长时间才能确保将离子对冲出去？ 3、测定维生素B9时，需要用SPE进行萃取，我的SPE柱子是HYPERSEP C18 500MG/3ml 的，这个可以重复使用么？我查询了下说萃取分为四部：柱的活化和平衡、上样、冲洗和洗脱感兴趣的化合物，冲样是用一种强得能洗脱杂质而又弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质；洗脱是用溶剂将被吸附在萃取柱上的化合物洗脱在溶液里，也就是说上样后得到的液体和冲样得到的液体要丢弃掉，洗脱的液体留下是吧？ 如果大神们看到我的提问，求回复指导下，谢谢众大神。 [ Last edited by archbishop on 2015-9-16 at 20:59 ] |
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【答案】应助回帖
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archbishop: 金币+2 2015-09-17 16:19:51
archbishop: 金币+2 2015-09-17 16:19:51
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先来句题外话：姑娘字不错啊~ 好，下面切入正题啊： 1、你这个公式仔细琢磨是不对的。如果你对杂质B是以浓度单位表示，那么你的待测固体A其实也以浓度表示了，还是假设你称样量为m，整个溶剂体积为V，那么你的待测固体A浓度实际为m/V，你进样量是不会影响杂质B与待测固体A之间的质量比的。因为它们在同一个溶剂体系下。 我不知道你那个待测固体A里面有没有杂质B，假设没有啊。那么这个标曲要怎么建立呢？假设你的杂质B限度值（100%）为10 ppm，那么这个标曲范围大概就是从5 ppm~15 ppm，也就是说如果你称1 g待测固体A（这个质量要固定），不管你用10、25还是50mL溶剂去溶解，你要加入的杂质B量就是从5 ug~15 ug，杂质B浓度会因体积改变而不同，但杂质B与待测固体A之间的质量比一直是固定的 2、你这个色谱条件有啊：The mobile phase was composed of 24% methanol (v/v) in aqueous potassium phosphate buffer(3.5 mM KH2PO4 and 3.2 mM K2HPHO4), pH 6.8, containing 5 mM tetrabutylammonium dihydrogen phosphate(Sigma) as an ion-pairing agent.简单说就是甲醇：缓冲盐水溶液（24:76），缓冲盐水溶液为3.5 mM KH2PO4 and 3.2 mM K2HPHO4，调pH为6.8，并且含有5mM四丁基磷酸铵（离子对试剂） |
12楼2015-09-17 16:07:23
2楼2015-09-16 22:19:40
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 金币+1 2015-09-16 23:19:52
感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 金币+1 2015-09-16 23:19:52
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1. 一般情况下 都会用ug/ml 为什么非要用 ug/g 2. 我分析用很多离子对， 一般用水相慢慢把离子对换出来。比如你的流动相是 离子对缓冲：甲醇（60:40）。 做完实验后慢慢换成 水：甲醇 60:40。 然后进行一般的柱子日常维护， 比如10%或20% 甲醇冲洗。 3. 一般不重复使用，a) 面粉中的大分子可能被吸附在柱子上很难洗脱，影响柱效。b）下一次洗脱B6中可能会引入杂质。 一般用TLC 检测是否目标化合物是否洗脱出来（洗脱顺序可以先用TLC 估量一下）。然后收集洗脱液，合并旋蒸。 |
3楼2015-09-16 22:34:13
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4楼2015-09-17 08:04:57