| 查看: 2848 | 回复: 7 | |||
learningying铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
Weatern Blotting实验用ECL显色请求指导
|
|
Weatern Blotting实验用ECL显色请求指导，背景一直很深，有时候整个膜都没有办法拍照，我们用的是ECL染色，然后选择感光照片进行显影，但是结果如下，请指正。具体的实验过程如下： Sample Text 蛋白样品制备 ：按照常规的方法进行，蛋白可溶。 蛋白浓度测定：BCA蛋白浓度测定试剂盒 上样量30ug，大约体积是3ul。 (3) 聚丙烯酰胺凝胶电泳 先使用80 V恒压电泳约40min，观察到溴酚蓝进入分离胶界面的时候使用120V恒压电泳80min后，当溴酚蓝到达胶的底端处附近停止电泳。 （4）转膜. 恒压15V转移30min，可以看到Marker 条带清晰，分散开来。 （5）封闭 转膜结束，PBST中，漂洗3次，每次5 min，以便洗去膜上的转膜液。 吸尽转膜液，加入Western封闭液(购自碧云天)，在侧摆摇床上缓慢摇动，室温封闭60min或4℃封闭过夜。 （6）免疫染色 稀释一抗 1:1000 ；二抗 1:5000;加入PBST，加入PBST洗膜3次，每次15min。 （7）ECL发光显色 1.在暗室里将ECL试剂盒中的A液和B液等体积充分混匀。 2，将ECL混合液体覆盖到PVDF上吸附了蛋白的一面，室温下(25℃)反应1min，用平头镊钳住PVDF膜淋去多余的液体。 3.暗室中将PVDF膜置于压片盒中的两层保鲜膜中间，其中吸附有蛋白质的一面朝上，平整地放置在压片盒中。 4.将曝光的胶片放在显影液中显影3min，经过清水冲洗除去显影液后将胶片浸没在定影液中1min。 |
回复此楼» 猜你喜欢
2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B?
已经有5人回复
-
职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊
已经有4人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有10人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有30人回复
-
综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？
已经有13人回复
-
是这周出结果还是下周出结果？
已经有3人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有9人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有4人回复
-
帮忙看看fileCode
已经有13人回复
-
为什么网上很多人说本周 12号出结果
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
kobe199613
木虫之王 (知名作家)
- 应助: 51 (初中生)
- 贵宾: 0.198
- 金币: 70492.8
- 散金: 3123
- 红花: 231
- 沙发: 29
- 帖子: 5504
- 在线: 978.8小时
- 虫号: 606575
- 注册: 2008-09-19
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
learningying: 金币+1, ★有帮助 2015-09-16 10:23:41
感谢参与，应助指数 +1
learningying: 金币+1, ★有帮助 2015-09-16 10:23:41
|
感觉显影时间有点长啊，很久不做了，也不是很确定了，还有就是拍照的时候曝光时间，过长的话背景也会很深。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-09-16 09:39:19
3楼2015-09-16 10:49:17
learningying
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 5430.9
- 散金: 323
- 红花: 34
- 帖子: 1075
- 在线: 256.6小时
- 虫号: 2055341
- 注册: 2012-10-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2015-09-16 10:56:26
5楼2015-09-16 11:36:48
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
learningying: 金币+164, ★★★很有帮助 2015-09-16 19:35:15
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:27
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:46
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:57
learningying: 金币+164, ★★★很有帮助 2015-09-16 19:35:15
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:27
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:46
youlinglyw: 金币-50, 原楼主操作错误，根据楼主要求，回收部分金币 2015-09-21 14:36:57
|
可以参考里面的解决方法，或者看看其他公司的western blot trouble shooting |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : abcam实验方案大全.pdf
2015-09-16 11:50:23, 5.64 M
6楼2015-09-16 11:52:24
诸葛小汐
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 5447.1
- 红花: 1
- 帖子: 161
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 1789711
- 注册: 2012-05-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
7楼2015-09-16 13:34:21
learningying
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 5430.9
- 散金: 323
- 红花: 34
- 帖子: 1075
- 在线: 256.6小时
- 虫号: 2055341
- 注册: 2012-10-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2015-09-16 16:01:32
