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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 填料粒径减小分离度却降低了，不理解，请各位高手指点！
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yixiaonan

铜虫 (小有名气)

[交流] 填料粒径减小分离度却降低了，不理解，请各位高手指点！ 已有3人参与

我们用反相分析一重组蛋白，之前用的是粒径为5微米的C4柱，后为了提高分离度购进了粒径为3.5微米的C4色谱柱，但分离效果还不如之前的。
不是减小粒径会提高分离度么?不知道问题出在哪里，还请诸位高手指点迷津！
非常感谢！
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superyeast

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好好学习，天天向上！
1楼 2015-09-11 17:02:55
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superyeast

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分蛋白不光要看颗粒度，还要看孔径。一般小分子用的100埃填料就不适合。做蛋白分离应该用300埃附近孔径的填料。

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5楼2015-09-12 06:19:58
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啃树叶的虫

新虫 (小有名气)
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蛋白的容易堵，你变小的会不会堵了？如果方便我可以给你找些实际检测的实例给你参考参考。
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我散金币啦
2楼2015-09-11 17:25:24
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yixiaonan

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 啃树叶的虫 at 2015-09-11 17:25:24
蛋白的容易堵，你变小的会不会堵了？如果方便我可以给你找些实际检测的实例给你参考参考。

好呀，如果是堵了会怎么样？
非常感谢你呀！
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好好学习，天天向上！
3楼2015-09-11 17:27:00
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沸腾才精彩

铜虫 (小有名气)
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至少给个图谱才能看出来

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试问天下谁不难！
4楼2015-09-12 01:01:15
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yixiaonan

铜虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-12 06:19:58
分蛋白不光要看颗粒度，还要看孔径。一般小分子用的100埃填料就不适合。做蛋白分离应该用300埃附近孔径的填料。

您好！
我们用的是AdvanceBio RP-mAb C4的柱子，粒径3.5微米，孔径是450埃的。
之前用的C4柱子粒径是5微米，孔径是300埃的。
您能帮我分析分析吗？
我是个菜鸟，请多指教哈！
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好好学习，天天向上！
6楼2015-09-16 09:38:45
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superyeast

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6楼: Originally posted by yixiaonan at 2015-09-15 17:38:45
您好！
我们用的是AdvanceBio RP-mAb C4的柱子，粒径3.5微米，孔径是450埃的。
之前用的C4柱子粒径是5微米，孔径是300埃的。
您能帮我分析分析吗？
我是个菜鸟，请多指教哈！...

你需要把详细条件贴出来才能试图分析。

分蛋白时常常需要对柱子加热，甚至很热。比方你那个AdvanceBioRP的应用示例就加热到了80度。你加到那么高了吗？

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7楼2015-09-17 11:23:44
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yixiaonan

铜虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-17 11:23:44
你需要把详细条件贴出来才能试图分析。
分蛋白时常常需要对柱子加热，甚至很热。比方你那个AdvanceBioRP的应用示例就加热到了80度。你加到那么高了吗？
...

不好意思，我们用的是Agilent AdvanceBio RP-mAb  
货号为793975-904 C4, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm的柱子，我们在60度的条件下进行分析的，他们的测试报告上用的也是60度。
流动相A：水+0.1%TFA
流动相B：乙腈+0.1%TFA
流速1.0ml/min
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好好学习，天天向上！
8楼2015-09-18 14:22:26
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yixiaonan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by superyeast at 2015-09-17 11:23:44
你需要把详细条件贴出来才能试图分析。
分蛋白时常常需要对柱子加热，甚至很热。比方你那个AdvanceBioRP的应用示例就加热到了80度。你加到那么高了吗？
...

待分析样品理论分子量为70000Da
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好好学习，天天向上！
9楼2015-09-18 14:40:24
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yixiaonan at 2015-09-17 22:22:26
不好意思，我们用的是Agilent AdvanceBio RP-mAb  
货号为793975-904 C4, 4.6 x 150 mm, 3.5 μm的柱子，我们在60度的条件下进行分析的，他们的测试报告上用的也是60度。
流动相A：水+0.1%TFA
流动相B：乙腈+0. ...

流动相比例呢？

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10楼2015-09-19 23:21:35
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