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Snuggle安

新虫 (初入文坛)

[求助] 大家在做western blot实验时,样品都是怎么处理的呀?已有2人参与

RT
最近要开始做Western blot,我的样品是动物药的细粉,样品制备的话是不是不能直接稀释上样?要是做前处理的话,需要怎么处理比较好呢?
我查了一些,发现每个不同的样品,处理方法也不同,大家做western时都是怎么处理样品的呢?
刚刚涉及生物这方面,新手很多东西都不太懂,大家一起来交流,我也多学习一下~
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Snuggle安

新虫 (初入文坛)

你们用的裂解液的配比都是怎么确定的呀?
9楼2015-09-12 10:47:30
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jingshuikeke

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-11 22:57:26
我的是细胞裂解蛋白  样品与5Xloading buffer 离心混匀后 95℃水浴煮5-10分钟 离心 冷却后 上样即可
2楼2015-09-11 12:01:20
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evangelina

无虫 (小有名气)

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★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-11 22:57:41
Snuggle安: 金币+2 2015-09-12 10:44:36
我有时候懒惰会直接把2X loading dye 加到移走培养液的细胞上面,再用枪头把蛋白吸出来
不是很正规,但是很快
3楼2015-09-11 12:07:03
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380218013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-11 22:58:02
Snuggle安: 金币+3 2015-09-12 10:44:27
WB用于检测蛋白。你的样品肯定是中生物类的蛋白药物。稀释之前要选择buffer,生理盐水或者PBS,混匀不要剧烈。既然做成药物了,应该知道含量是多少。适当的稀释,WB只需要一点的量既可以,只要抗体可以的话。
好好生活,努力赚钱
4楼2015-09-11 13:36:02
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