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酸奶一号银虫 (小有名气)
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[求助]
丝状真菌菌丝细胞中ROS检测
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各位虫友，大家好，小虫目前在做有关A.flavus菌丝中ROS检测，简述如下： 实验分组为control对照组（只加细胞）、损伤组（加细胞，然后用双氧水损伤）、实验组（加细胞，后加药品处理）。实验结束时吸取菌丝球经PBS洗涤后，加入浓度为10uM的DCFH-DA荧光探针溶液中，在37℃细胞培养箱内孵育30分钟，后用灭菌PBS洗涤三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。最后用荧光显微镜观察细胞荧光强度。 本人购买的是sigma公司的DCFH-DA荧光探针粉末（2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate），DMSO配成10mM储备液，-20℃保存，实验时稀释1000倍至浓度为10uM使用。DCFH-DA(2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐)是非标记性的氧化敏感的荧光探针，DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光以判定细胞内活性氧的水平。 哪位小伙伴有做过或正在做相关试验，可以相互联系交流一下！！  图片1.jpg |
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