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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 丝状真菌菌丝细胞中ROS检测
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酸奶一号

银虫 (小有名气)

[求助] 丝状真菌菌丝细胞中ROS检测

各位虫友，大家好，小虫目前在做有关A.flavus菌丝中ROS检测，简述如下：
实验分组为control对照组（只加细胞）、损伤组（加细胞，然后用双氧水损伤）、实验组（加细胞，后加药品处理）。实验结束时吸取菌丝球经PBS洗涤后，加入浓度为10uM的DCFH-DA荧光探针溶液中，在37℃细胞培养箱内孵育30分钟，后用灭菌PBS洗涤三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。最后用荧光显微镜观察细胞荧光强度。

本人购买的是sigma公司的DCFH-DA荧光探针粉末（2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate），DMSO配成10mM储备液，-20℃保存，实验时稀释1000倍至浓度为10uM使用。DCFH-DA(2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐)是非标记性的氧化敏感的荧光探针，DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光以判定细胞内活性氧的水平。

哪位小伙伴有做过或正在做相关试验，可以相互联系交流一下！！

丝状真菌菌丝细胞中ROS检测
图片1.jpg
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DNA-RNA-dsRNA-ssRNA-cDNAs
1楼 2015-09-10 16:29:28
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诗意花香

铜虫 (初入文坛)
同问，希望分享各自的详细步骤。怎样解决PBS洗涤时细胞过少，离不出问题。
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2楼2015-09-16 15:02:57
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匿名

用户注销 (小有名气)
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3楼2015-09-21 16:04:44
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组织派我来

新虫 (小有名气)
那个发荧光部位就是产生活性氧的吧，我做过叶片的，这个部位是不是代谢旺盛所以活性氧产生比较多？

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4楼2015-09-21 16:16:34
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txbhqq

新虫 (小有名气)
请问用荧光显微镜如何观察？正在做，今晚没拍到图片

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-02-27 23:43:07
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