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hua_td2008

[交流] 请教:柱效比前一天降低很多会是什么原因?该如何解决?

我用的是Agilent zorbax Eclipse XDB-C8 柱子 15cm长。流动相:磷酸二氢钾(10.54g溶于775ml水中,用磷酸调PH至2.5)-乙腈(775:225)。前天做柱效是5500,昨天做2200,今天做柱效不足2000。
请问会是什么原因啊?柱效还能上去么?这柱子还能用么?
很急……请高人帮祝!谢谢了
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tjegg

铁杆木虫 (著名写手)

进气泡的可能性较大,倒过来冲柱子。
除了你的亲人,没有人应该对你好,对你好的人,一定要珍惜。
2楼2008-08-27 21:06:42
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hua_td2008

可是柱压并没有明显波动啊,会是进气泡么?
倒过来冲柱子的话用多大的流速,用什么流动相较好啊?
3楼2008-08-28 08:52:55
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lanwoco

铜虫 (小有名气)

缓冲盐的浓度不低啊,这也有可能为原因之一,是不是非要用这么高的浓度呢?
4楼2008-08-28 09:27:52
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hua_td2008

流动相都是按照国家标准配置的,应该不会有问题吧
5楼2008-08-28 09:41:21
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twt_1975

木虫 (小有名气)

缓冲盐的问题,浓度太大了,做完样后要彻底清洗柱子,最好先用水冲一会,低于20分钟,再用低于5%甲醇多冲一会,将盐彻底清洗掉。再过渡到甲醇。
6楼2008-08-28 10:33:41
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hua_td2008

那我这柱子还能用么 柱效还能否提上来啊……??
7楼2008-08-28 13:28:34
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chenfengpolang

金虫 (著名写手)

★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教!
可以,但要用5%热甲醇水冲1小时以上,0.5ml/min,然后过渡到甲醇,有柱温箱的话,直接将柱温提到45度,不加热难于解决。另外,如保留时间在15分钟前的话,可降低乙腈2个点,也可提高柱效。坚决反对倒冲,否则报废就在眼前。
乘风破浪,生生不息,衔一枝橄榄,为你带来永远的春天,和你慢慢地变老,幸哉,乐哉!
8楼2008-08-28 17:44:06
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chenfengpolang

金虫 (著名写手)

记住,冲柱子尤其是高盐流动相,一定要有耐心,水冲不要少于2小时,有机最好活化多于2小时,也可低流速过夜。
乘风破浪,生生不息,衔一枝橄榄,为你带来永远的春天,和你慢慢地变老,幸哉,乐哉!
9楼2008-08-28 17:47:21
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nnxll

金虫 (正式写手)

★
karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢指点!
1.你的缓冲盐浓度太高。2.水相比例比较高。一般AGILENT色谱柱不可以采用高的水相的体系。建议采用至少要含75%的水相,进行冲洗。
10楼2008-09-22 20:02:03
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