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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 质粒跑出这样的电泳图可以割胶回收吗？
汕头大学海洋科学接受调剂
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冰扣儿

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒跑出这样的电泳图可以割胶回收吗？ 已有9人参与

各位大神好！marker从上到下是15000,10000,7500,5000,3000,1500,1000,500.这个电泳图是7584bp的质粒跑的，双酶切的片段50bp，所有整齐像一字的条带都是双酶切的，两条特别的条带是原质粒，原质粒跑成这样能割胶回收吗？

质粒跑出这样的电泳图可以割胶回收吗？
QQ图片  09 09.jpg
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优秀，是一种习惯！
1楼 2015-09-10 00:15:16
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2015-09-13 15:20:59
遇到过，我的质粒也是大约7kbp，跑出来是15K+。切下来继续做吧，如果是富集，是所有的胶溶掉后过 同一个柱子吧。我一般就切1微克，量就足够了。连接连不上是不是黏性啊，我最近做的黏性末端就不好连。此外体系中插入 ...

多谢！已经连上了，最后重设了体系，根据这个公式连计算片段和载体分别需要的量。公式是：插入片段体积(μl) = T载体量(ng)x 插入片段大小(kb)÷T载体大小(kb)x插入片段与T载体的摩尔比(3~10:1) ÷ 插入片段浓度(ng/μl)。载体与片段相差不大一般用5:1，大的话就用8:1.
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优秀，是一种习惯！
26楼2015-09-14 11:59:14
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-10 23:04:40
有点奇怪啊，原质粒由于超螺旋构象，应该跑得比酶切的快才对，怎么会在上面呢
话说原质粒为什么要切胶回收呢，重新转化提质粒不就好了？
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2楼2015-09-10 07:27:51
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这也不对啊，切开的应该跑的慢啊。
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3楼2015-09-10 09:16:50
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-10 07:27:51
有点奇怪啊，原质粒由于超螺旋构象，应该跑得比酶切的快才对，怎么会在上面呢
话说原质粒为什么要切胶回收呢，重新转化提质粒不就好了？

我要割胶回收连接目的片段
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优秀，是一种习惯！
4楼2015-09-10 11:20:43
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