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汕头大学海洋科学接受调剂
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清萱楚豫

铁虫 (小有名气)

[求助] 5‘RACE做了大半年无果 已有1人参与

有谁做RACE的吗?我做5’RACE做了几个月了,一无所获,刚开始是不出带,后来出了一个带测序不对。现在换个引物,出了带子竟然有两条,想拿去测序,转化蓝白斑时,盘子长不出斑点了,都是糊的,重复了几次还是糊的,不晓得哪里出问题了。还有5‘RACE的引物是从3’RACE克隆出的片段里抠出来的,是不是我之前3‘RACE做的不好,导致5'RACE的引物不好,所以5’RACE才不好出带呢,各位达人们,能否给点意见或建议呢
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Huobol at 2015-09-09 20:42:00
做RACE,模板质量是第一地位的,也就是你反转录前的rna是很重要的,可以考虑重新合成模板。而且要做巢式PCR,多设计几个引物,我设计了6个才弄出来,当然还得看运气,我帮师兄做了一个基因的race,还是我设计的引物 ...

一轮产物稀释多少倍呀

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4楼2016-06-09 21:09:09
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做RACE,模板质量是第一地位的,也就是你反转录前的rna是很重要的,可以考虑重新合成模板。而且要做巢式PCR,多设计几个引物,我设计了6个才弄出来,当然还得看运气,我帮师兄做了一个基因的race,还是我设计的引物,各设计了2个引物,引物回来的当天下午做了两轮PCR就把5'和3'都P出亮带了,当然第一轮无亮带,把一轮产物稀释后做二轮巢氏引物PCR后成功P出亮带,送测序也都是对的。做race的心得网上再搜搜吧~有时运气很重要,最近我的运气不是很好,做啥都很慢啊~哈哈~

发自小木虫Android客户端
让羽毛再飞一会儿
2楼2015-09-09 20:42:00
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liubolin945

铁虫 (小有名气)

朋友,我们实验室多买了一个smarter的试剂盒,想转让出去,可开发票的,
谢谢

如有打扰,实在抱歉,
QQ:277046172
3楼2015-10-27 09:35:44
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