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5‘RACE做了大半年无果 已有1人参与
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| 有谁做RACE的吗？我做5’RACE做了几个月了，一无所获，刚开始是不出带，后来出了一个带测序不对。现在换个引物，出了带子竟然有两条，想拿去测序，转化蓝白斑时，盘子长不出斑点了，都是糊的，重复了几次还是糊的，不晓得哪里出问题了。还有5‘RACE的引物是从3’RACE克隆出的片段里抠出来的，是不是我之前3‘RACE做的不好，导致5'RACE的引物不好，所以5’RACE才不好出带呢，各位达人们，能否给点意见或建议呢 |
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liubolin945
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3楼2015-10-27 09:35:44
Huobol
至尊木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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做RACE，模板质量是第一地位的，也就是你反转录前的rna是很重要的，可以考虑重新合成模板。而且要做巢式PCR，多设计几个引物，我设计了6个才弄出来，当然还得看运气，我帮师兄做了一个基因的race，还是我设计的引物，各设计了2个引物，引物回来的当天下午做了两轮PCR就把5'和3'都P出亮带了，当然第一轮无亮带，把一轮产物稀释后做二轮巢氏引物PCR后成功P出亮带，送测序也都是对的。做race的心得网上再搜搜吧～有时运气很重要，最近我的运气不是很好，做啥都很慢啊～哈哈～ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-09-09 20:42:00
yuguiyan
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- 专业: 原子和分子物理
4楼2016-06-09 21:09:09
