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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：RT_PCR中的问题
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liaup

木虫 (小有名气)

[交流] 求助：RT_PCR中的问题

做的是从细胞上清中提取病毒RNA，然后rt-pcr.现在的问题是阳性（病毒液提取的rna）对照可以扩增出目的条带，可是样本却扩不出来，是不是样本中病毒RNA的含量低，或者PCR的体系不适合，怎样去验证可能的原因呢？请高手指教啊！

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:24 ]
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1楼 2008-08-27 10:30:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):积极交流奖
难道上清里头提取出来的，确实是RNA，但不是病毒的RNA，而是一些其他的东西，比如死细胞的RNA~~~
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7楼2008-08-28 12:26:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
抽完病毒RNA测下OD或者跑下胶看看到底有没有抽出来或者浓度如何再说吧~~
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2楼2008-08-27 16:24:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
==b
我的意思是上清里头的病毒RNA
把实验拆开很多步，设置质检的关卡，一查就知道哪里出错了
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3楼2008-08-27 16:25:01
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赵敏9565

铁虫 (小有名气)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):积极交流奖
1.增加PCR循环，2.加大模板量3.减少阳性对照模板用量

如果还是阳性对照有，样本没有，是否可以说你样本中检测不到病毒核酸！
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5楼2008-08-27 20:44:56
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