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liaup

木虫 (小有名气)

[交流] 求助:RT_PCR中的问题

做的是从细胞上清中提取病毒RNA,然后rt-pcr.现在的问题是阳性(病毒液提取的rna)对照可以扩增出目的条带,可是样本却扩不出来,是不是样本中病毒RNA的含量低,或者PCR的体系不适合,怎样去验证可能的原因呢?请高手指教啊!

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:24 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


xyklmu(金币+1,VIP+0):积极交流奖
难道上清里头提取出来的,确实是RNA,但不是病毒的RNA,而是一些其他的东西,比如死细胞的RNA~~~
7楼2008-08-28 12:26:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
抽完病毒RNA测下OD或者跑下胶看看到底有没有抽出来或者浓度如何再说吧~~
2楼2008-08-27 16:24:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

==b
我的意思是上清里头的病毒RNA
把实验拆开很多步,设置质检的关卡,一查就知道哪里出错了
3楼2008-08-27 16:25:01
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赵敏9565

铁虫 (小有名气)


xyklmu(金币+1,VIP+0):积极交流奖
1.增加PCR循环,2.加大模板量3.减少阳性对照模板用量

如果还是阳性对照有,样本没有,是否可以说你样本中检测不到病毒核酸!
5楼2008-08-27 20:44:56
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