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liaup木虫 (小有名气)
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[交流]
求助：RT_PCR中的问题
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做的是从细胞上清中提取病毒RNA，然后rt-pcr.现在的问题是阳性（病毒液提取的rna）对照可以扩增出目的条带，可是样本却扩不出来，是不是样本中病毒RNA的含量低，或者PCR的体系不适合，怎样去验证可能的原因呢？请高手指教啊！ [ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:24 ] |
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3楼2008-08-27 16:25:01
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liaup
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xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
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多谢你们！！！ 每次提完RNA都测了OD值，样本的A260/280一般为1.4-2.0。 RNA浓度为0.7-2.0μg/ml 其中阳性对照样本A260/280为1.73. RNA浓度为1.6μg/ml. PCR时循环数为31个，模板的用量样本我在50μl体系中加入5μl都试过，仍然没有结果，阳性对照我加3μl做过，可以p出目的条带。另外我将没有p出条带样本的PCR产物分别稀释25，50倍，作为模板再进行PCR，结果仍然没有p出条带 现在都做了接近40份样本了，连一份阳性的都没有，40份中一份都没有似乎不太可能吧。还是真的样本没有病毒的RNA（或者很低很低）。 不知道怎么判断， 请多多指教！ |
6楼2008-08-28 11:51:56