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一旺百旺新虫 (著名写手)
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[交流]
关于脂质体制备的过程中遇到的几个问题，交流一下大家的解决方法已有10人参与
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背景介绍：方法是薄膜法，欲包裹药物盐酸布比卡因，辅料是蛋黄卵磷脂和胆固醇。实验设备是旋转蒸发仪，摇床，冷冻干燥设备。 实验过程是蛋黄卵磷脂200mg和胆固醇94g溶于20ml氯仿，加入250ml的圆底烧瓶中，旋转蒸发1-3个小时，(旋转速度50r/min,37摄氏度，真空度0.1MPa),冷冻干燥机抽真空（真空度0.1MPa，30度），之后用20ml-30ml的pH=7.4的磷酸缓冲液溶解200mg的布比卡因后加入圆底烧杯中，放置于摇床上37摄氏度，150r/min过夜，0.8um的滤头过滤，很难过滤。用了半上午终于过滤了一些，之后测粒径和扫描电镜。 问题：1.实验其实目标的粒径在10-30um，但是薄膜法要获取这个粒径还是有一定难度的，大多是通过复乳法获得这个粒径范围的，如果用薄膜法，加入二棕榈酰磷脂酰甘油DPPG和三辛酸甘油酯TO是否能够获得这个粒径范围的脂质体，或者用这些辅料通过薄膜法怎么样才有可能获得这个粒径范围的脂质体。 2.称量蛋黄卵磷脂的时候遇到一个非常棘手的问题就是如何准确称量几十毫克或者几百毫克的蛋黄卵磷脂，因为药品比较贵中，买的量不多，而蛋黄卵磷脂容易黏在药匙上，药匙上会浪费很多，最后解决的方法是直接称量到烧杯中，药匙用超小的药匙，有的人提建议是用减重法，将整包药都称量一下，然后取出来一部分后，药匙上的用后续的溶液冲洗来，感觉操作起来还是挺有难度的，另一种方法是直接将买来的1g蛋黄卵磷脂都配成浓溶液，但是感觉溶液的稳定性很难保证，不知道还有别的好办法去准确称量？另外不知道二芥酰卵磷脂DEPC和二棕榈酰磷脂酰甘油DPPG是否和蛋黄卵磷脂一样很粘稠，称量的时候也会遇到这种情况？ 3.实验方案中加入的蛋黄卵磷脂和胆固醇是否是太多了？有人指出蛋黄卵磷脂的浓度应在1-5mg/ml，这个浓度是否靠谱，这个浓度的溶剂是氯仿还是后面的缓冲液？用的圆底烧瓶是否有点大？蛋黄卵磷脂和胆固醇的比例一般多少合适呢？看资料上大多是摩尔比2：1 4.盐酸布比卡因药典上写的是溶于水的，为啥加入磷酸缓冲液溶解的时候感觉很多都没有溶解呢，超声了一下，效果不是很好。 5.做完以后发现成膜有点不均匀，不是人家均匀透明的膜，我感觉可能是我的辅料配比有问题，我的配比是否真有很大问题？ 6.测粒径的时候用的是马尔文2000来测，测的时候是稀释于生理盐水中测的，测试过程中，需要知道样品的折光率，但是这个折光率大概应该是在什么范围呢？不同的折光率测出来的结果差别还是挺大的，最后得出来这么多的结果怎么看哪个更可用呢？看拟合曲线后的偏差？还是什么？如果看偏差的话偏差小于多少可以认为是可信的呢？ 7.测扫描电镜，样品应该怎么处理呢？我们的扫描电镜能测的只能是粉末，本来考虑用抽真空把液体抽干，放在培养皿上试了试，结果很快的出现了白色粉了，但是又过了半个小时以上吧，又成透明的膜的状态了，用东西刮下来，有点黏糊，没有办法测电镜。我在想这个过程很诡异，怎么解释呢，这样处理样品是否存在问题，脂质体应该都破了吧，想着再试试冷冻干燥，但是觉得还是存在问题的，脂质体能禁得起这样折腾？膜结构被破坏了吧。如果要冷冻干燥的话应该怎么进行呢？ |
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11楼2016-11-21 21:18:02
2楼2015-11-01 21:18:25
3楼2015-11-23 10:30:15
5楼2016-01-17 20:50:14