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yangym1123

木虫 (小有名气)

[交流] 如何提高操作的稳定性?

最近在做一个基因的组织分布,做了几次发现操作很不稳定,尽管我自己觉得都非常的小心了,可以每次做出来的结果仍然不同,内参基因都不能每次得到亮度均一的条带,请教各位大侠那方面有问题呢,怎样提高操作的稳定性呢?谢谢!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):积极交流奖
RT-PCR吗?
抽提完后,定量要定准,最好开机预热30min
同时稀释的时候要稀释得准
PCR混养的时候,共有的组分不要分开每一管单独混,应该混成一个stock再分装,减少枪吸吹时的不准
循环数不要搞太高了,恰当就好~
2楼2008-08-26 21:31:05
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qfzhang

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):积极交流奖
1 没有必要每个步骤都非常小心,明白那个是最关键的步骤
2 稀释液体的时候,如果稀释倍数非常高,比如1ul加到1ml里面,建议不要直接稀释,先做一个10倍稀释的母液
3 至于操作的标准,要看实验室有没有良好的传统和训练了, 比如如何用移液器这等小事
3楼2008-08-27 08:38:48
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):积极交流奖
1,用同一台PCR仪
2,用同一套移液枪
3,可以用预混好的PCR MIx
4,每一次都自己亲自操作
5,模板要一次稀释的
4楼2008-08-27 11:31:05
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yangym1123

木虫 (小有名气)

非常感谢各位的热心相助,谢谢!
5楼2008-09-02 23:35:52
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