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sundongmei

新虫 (小有名气)

[交流] 植物内生菌分离

我是刚刚接触微生物试验,现在要做一种中药根部内生菌的分离,我做了两次都是对照长菌了,好像是表面消毒不彻底或者是试验技术不过关,我是依次用75酒精5分钟,千分之一升汞15分钟,无菌水漂洗5次,然后切片的。那位高手给指教一下,问题可能是出在哪里?这步试验的注意细节是什么?本人在此谢过了,呵呵 可惜本人只有1个金币无法致谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 13:49 ]
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reasonspare

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):分析的很有道理,^_^
引用回帖:
Originally posted by sundongmei at 2008-8-26 15:51:
我是刚刚接触微生物试验,现在要做一种中药根部内生菌的分离,我做了两次都是对照长菌了,好像是表面消毒不彻底或者是试验技术不过关,我是依次用75酒精5分钟,千分之一升汞15分钟,无菌水漂洗5次,然后切片的。那 ...

错误有:
首先75% 酒精和升汞都有消毒功能 同时使用就相当于1+1=0
前者消毒,后者消毒,但是同时使用,就会有漏网之鱼。

表面消毒第一步:
消除表面张力,就是说这个步骤就是让后续的消毒处理充分接触组织。
通常用无水乙醇,或者95% 以上。1-5min
接下来,可以选择:75%乙醇15min
                           0.1%升汞5min
                           3% 过氧化氢 10min
                           10%次氯酸钠 15min

你选择酒精5min, 既没有达到彻底杀毒的目的,也没有达到消除表面张力的目的。
也就是说该杀死的没有死,反而给升汞留下死角,
通常升汞不超过5min,就你的protocol而言,再长的时间都有漏网之鱼。
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
8楼2008-08-27 02:47:55
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

你的“对照”是什么?

[ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-26 at 16:15 ]
书到用时方恨少 钱到月底不够花
2楼2008-08-26 16:14:08
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sundongmei

新虫 (小有名气)

对照是最后一次无菌水涂布平板
3楼2008-08-26 16:38:34
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sundongmei

新虫 (小有名气)

两次试验对照都是长出细菌
4楼2008-08-26 16:39:27
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