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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助！引物二聚体和目的条带差不多亮，怎么降低二聚体数量啊？
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xiaofan66

[交流] 求助！引物二聚体和目的条带差不多亮，怎么降低二聚体数量啊？

如题：
求助！引物二聚体和目的条带差不多亮，怎么降低二聚体数量啊？采取什么办法能降低引物二聚体的亮度啊？
如果二聚体和目的条带差不多亮，能上DGGE么？
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1楼 2008-08-25 20:30:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
=v=
我最近做PCR做到快疯了~~~所以自然有很多心得体会
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5楼2008-08-25 21:26:51
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
得提高特异性

有三种尝试方法
1提高退火温度
2提高Mg2+浓度
3加入一定浓度的DMSO

如果能进行胶回收，得到你的目的带，有二聚体也没有关系
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2楼2008-08-25 20:53:17
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复，积极交流奖
提高退火温度是可行的
提高镁离子浓度值得商榷，如果你的体系里头是2.5mM的Mg，那么尝试降低为2.0mM，提高Mg会增加非特异性
DMSO需要摸浓度，一般从3%~5%开始摸，以1%为间隔，DMSO浓度太高会抑制Taq活性。另外，似乎DMSO和Mg也有很纠结的关系……这是我的经验，但我说不出到底是什么关系，反正我习惯做很多组合实验
降低引物浓度也有助于降低dimer
另外，重新设计引物也不失为一个好办法~~~
还有，可以尝试做降落PCR，能够提高目的条带的浓度
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3楼2008-08-25 20:57:52
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
三磷酸腺苷 说的很好很专业
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4楼2008-08-25 21:12:14
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