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ssyt123

金虫 (小有名气)

[交流] 请教各位,考马斯亮蓝测定蛋白质

请教各位,考马斯亮蓝测定蛋白质可靠吗,我们测定时怎么老是空白的吸光度0.5左右,很奇怪。方法很注意,重复了很多次了,比色皿为玻璃比色皿,用后95%乙醇冲洗。空白太大,我感觉就没法测定了阿
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fruit

木虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
你用空白调零,空白的吸光度还是0.5?
那就是你的分光光度计的问题了。
2楼2008-08-25 18:10:00
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ssyt123

金虫 (小有名气)

谢谢,不是的

我用蒸馏水做空白,调零。然后测定蒸馏水加上显色液的空白样品 ,本来应该在0左右,可是老在0.5左右。分管光度计没问题,测定氨氮完全正确。
3楼2008-08-25 22:21:59
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sbt72

金虫 (小有名气)

是不是你的空白有问题?为什么用蒸馏水调零?应该用显色液和同体积的提取液调零啊。
4楼2008-08-25 22:52:28
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fruit

木虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
哪有这么干的,空白对照,应该是除了蛋白质以外,其他的都应该和待测样品中的一样。

你的问题应该是显色液中有吸收造成的,所以你只能用除了蛋白以外其他都和待测样品中的成分、浓度等一样的溶液做空白对照。
5楼2008-08-25 23:07:10
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qfzhang

银虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
bradford 法测定蛋白浓度最大的缺陷是受去垢剂的影响太大,而在裂解细胞收蛋白的时候是必定用到去垢剂的,这个方法根本不准。还是换bca法吧,受去垢剂的影响很小的。
6楼2008-08-26 08:28:56
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ssyt123

金虫 (小有名气)

谢谢各位!

谢谢各位!
7楼2008-08-26 12:45:15
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ssyt123

金虫 (小有名气)

标准方法应该水不含蛋白质水做空白吧,然后测定空白加显色液。

标准方法应该水不含蛋白质水做空白吧,然后测定空白加显色液。测定氨氮是钠氏试剂比色法就是这样的阿。这样可以检测配置溶液是否过期或含有杂质。国标里测定氨氮是这样的阿
8楼2008-08-26 12:49:35
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