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一地鸡毛顾铁虫 (初入文坛)
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[求助]
点突变遇到的难题？ 已有1人参与
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用试剂盒做点突变。 引物设计如下： Forward primer 685: 5- TGT ATC TAT GCC GTA AAG GCG AAC ACC GCT GTA TGG CAC TGG -3 Rervese primer 685: 3- CGT CGG CTA TAC GAA ATG ATG ACA TAG ATA CGG CAT TTC CGC -5 PCR体系：ddhH20:18.5UL buffer:25ul dNTP 1UL 模板：0.5ul 引物R :2ul 引物F:2ul DNA聚合酶1ul PCR扩增条件：预变性 98度 30s 变性 95度 15s 退火 67度 15s 延伸 72度 45s 30个循环 彻底延伸 72度 5Min 结果，没有P出来，有弥散带，没有加模板的空白对照没有弥散带，模板中大部分为非超螺旋，因为有三条带，最上面的最浓，其余两个比较浅 。求大家帮我分析一下原因 |
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3楼2016-07-13 22:34:34
一地鸡毛顾
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 62.1
- 散金: 20
- 帖子: 25
- 在线: 31.2小时
- 虫号: 3031911
- 注册: 2014-03-09
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2015-09-02 10:39:26
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