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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 点突变遇到的难题？
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一地鸡毛顾

铁虫 (初入文坛)

[求助] 点突变遇到的难题？ 已有1人参与

用试剂盒做点突变。
引物设计如下：
Forward primer 685: 5- TGT ATC TAT GCC GTA AAG GCG AAC ACC GCT GTA TGG CAC TGG -3
Rervese primer 685: 3- CGT CGG CTA TAC GAA ATG ATG ACA TAG ATA CGG CAT TTC CGC -5

PCR体系：ddhH20:18.5UL
                 buffer:25ul
                dNTP 1UL
                模板：0.5ul
                引物R :2ul
                引物F:2ul
                DNA聚合酶1ul
PCR扩增条件：预变性 98度 30s
                        变性   95度 15s
                        退火  67度  15s
                        延伸  72度 45s
                       30个循环
                      彻底延伸 72度  5Min
结果，没有P出来，有弥散带，没有加模板的空白对照没有弥散带，模板中大部分为非超螺旋，因为有三条带，最上面的最浓，其余两个比较浅    。求大家帮我分析一下原因
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1楼 2015-09-02 09:47:41
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象牙白

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

预变形，我选的是98度5min
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小元，加油！
3楼2016-07-13 22:34:34
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一地鸡毛顾

铁虫 (初入文坛)
用的是上海翊圣生物科技有限公司的点突变试剂盒
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-02 10:39:26
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