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一地鸡毛顾

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 62.1
散金: 20
帖子: 25
在线: 31.2小时
虫号: 3031911
注册: 2014-03-09
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 点突变遇到的难题？已有1人参与

用试剂盒做点突变。
引物设计如下：
Forward primer 685: 5- TGT ATC TAT GCC GTA AAG GCG AAC ACC GCT GTA TGG CAC TGG -3
Rervese primer 685: 3- CGT CGG CTA TAC GAA ATG ATG ACA TAG ATA CGG CAT TTC CGC -5

PCR体系：ddhH20:18.5UL
               buffer:25ul
            dNTP 1UL
            模板：0.5ul
            引物R :2ul
            引物F:2ul
            DNA聚合酶1ul
PCR扩增条件：预变性 98度 30s
                     变性 95度 15s
                     退火  67度  15s
                     延伸  72度 45s
                     30个循环
                  彻底延伸 72度  5Min
结果，没有P出来，有弥散带，没有加模板的空白对照没有弥散带，模板中大部分为非超螺旋，因为有三条带，最上面的最浓，其余两个比较浅。求大家帮我分析一下原因

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