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一地鸡毛顾铁虫 (初入文坛)
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点突变遇到的难题？ 已有1人参与
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用试剂盒做点突变。 引物设计如下： Forward primer 685: 5- TGT ATC TAT GCC GTA AAG GCG AAC ACC GCT GTA TGG CAC TGG -3 Rervese primer 685: 3- CGT CGG CTA TAC GAA ATG ATG ACA TAG ATA CGG CAT TTC CGC -5 PCR体系：ddhH20:18.5UL buffer:25ul dNTP 1UL 模板：0.5ul 引物R :2ul 引物F:2ul DNA聚合酶1ul PCR扩增条件：预变性 98度 30s 变性 95度 15s 退火 67度 15s 延伸 72度 45s 30个循环 彻底延伸 72度 5Min 结果，没有P出来，有弥散带，没有加模板的空白对照没有弥散带，模板中大部分为非超螺旋，因为有三条带，最上面的最浓，其余两个比较浅 。求大家帮我分析一下原因 |
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一地鸡毛顾
铁虫 (初入文坛)
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