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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 腹水硫酸铵沉淀后上proteinG 柱子需要透析除盐吗？
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)

[求助] 腹水硫酸铵沉淀后上proteinG 柱子需要透析除盐吗？ 已有2人参与

问一下，腹水硫酸铵纯化大家都用的什么方法呢？看到有除盐的也有不除盐的，向后面再接着用rotein G的柱子纯化，是不是不需要硫酸铵这一步呢？
这个方法怎么样，也是从网上看到的
1. 待提取样品经4℃或室温离心13 000r/min(20000×g)，30min，收集上清；
2. 取上清约20ml与等体积生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40ml SAS，于4℃沉淀30min以上或过夜，使蛋白充分沉淀。
3. 13 000r/min，10min 4℃离心，弃上清。
4. 用12ml生理盐水溶解沉淀，同步骤（2）滴加8ml SAS，4℃1h。
5. 重复步骤（3）离心，用13.3ml生理盐水溶解沉淀，
6. 滴加6.6ml SAS，4℃1h； 
7. 重复步骤（4）离心后所得沉淀物用少许盐水溶解沉淀，并装入透析袋。
8. 用大于20倍体积的PBS于4℃透析，更换透析液数次，可置-20℃保存或进一步纯化。
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1楼 2015-08-30 21:53:44
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不需要沉淀这一步，用proteinG 或proteinA都可以的。
若沉淀后，最后好除盐，除盐可以用葡聚糖G-25直接过柱除盐，或超滤或透析，透析效果较差。除盐后能减少特异性吸附，比如疏水作用力，离子电荷静电力等，除盐后在用proteinG 或proteinA亲和纯化，纯度会增加，祝顺利。
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2楼2015-08-30 22:42:29
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千寻@德院

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-08-30 22:42:29
不需要沉淀这一步，用proteinG 或proteinA都可以的。
若沉淀后，最后好除盐，除盐可以用葡聚糖G-25直接过柱除盐，或超滤或透析，透析效果较差。除盐后能减少特异性吸附，比如疏水作用力，离子电荷静电力等，除盐后 ...

谢谢喽！还想问一下，抗体浓缩你用的什么方法呢?我没有浓缩管啊，用PEG?
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3楼2015-09-04 10:36:10
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这纯化好麻烦呀 你可以用磁珠法试试 腹水直接纯化 不做做预处理 纯度还好。我这有志昂生物的磁珠试用装你可以试试 有需要联系我吧

发自小木虫IOS客户端
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4楼2015-09-24 16:51:49
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