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腹水硫酸铵沉淀后上proteinG 柱子需要透析除盐吗？ 已有2人参与
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问一下，腹水硫酸铵纯化大家都用的什么方法呢？看到有除盐的也有不除盐的，向后面再接着用rotein G的柱子纯化，是不是不需要硫酸铵这一步呢？ 这个方法怎么样，也是从网上看到的 1. 待提取样品经4℃或室温离心13 000r/min(20000×g)，30min，收集上清； 2. 取上清约20ml与等体积生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40ml SAS，于4℃沉淀30min以上或过夜，使蛋白充分沉淀。 3. 13 000r/min，10min 4℃离心，弃上清。 4. 用12ml生理盐水溶解沉淀，同步骤（2）滴加8ml SAS，4℃1h。 5. 重复步骤（3）离心，用13.3ml生理盐水溶解沉淀， 6. 滴加6.6ml SAS，4℃1h； 7. 重复步骤（4）离心后所得沉淀物用少许盐水溶解沉淀，并装入透析袋。 8. 用大于20倍体积的PBS于4℃透析，更换透析液数次，可置-20℃保存或进一步纯化。 |
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