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Snow_amy新虫 (初入文坛)
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关于WB条件改进的问题 已有1人参与
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我用的材料是细菌，抗体是让公司免疫兔子得到的，这个抗体用纯化的蛋白去做是可以工作的，但是我用我的菌去做得不到目的条带，而且有很多杂带，如果用这个基因过表达的菌去做就可以得到想要的条带，一抗我是用的1:1000的稀释比例，如果我把一抗浓度用到1:500，只能是杂带更多更亮，在野生型中依旧没有目的条带。应该是在野生型中量比较低，求助各位大侠，看看能怎么改变一下！多谢多谢！ 从左往右依次的野生型菌，目的基因敲除的菌株，目的基因过表达的菌株，和GST标记的目的基因。  结果 |
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【答案】应助回帖
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Snow_amy: 金币+5, ★有帮助 2015-08-31 15:07:38
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Snow_amy: 金币+5, ★有帮助 2015-08-31 15:07:38
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虽然我不是做微生物的，谈点看法，单个细菌的蛋白表达量低很正常，过表达某一蛋白常常会抑制其他的蛋白，我觉得可能蛋白样品处理上要想想办法，用抗体加beeds抓取目的蛋白等办法，还要要看看这个蛋白原先是胞内的还是膜蛋白还是分泌蛋白。western结果有问题我认为常常是样品的问题。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-08-30 13:23:00
Snow_amy
新虫 (初入文坛)
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3楼2015-08-31 15:07:41