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叶子sunny

新虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR

大家好！我最近在做RT-PCR时遇到一点问题，请各位高手帮忙解决！
     用水和RT产物做模板，均能扩增出300bp左右的片段，而且引物、dNTP、Buffer、水等换过几次，用水做模板的都扩增出和RT产物做模板一样大小的产物。
    谢谢！
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1楼 2008-08-23 17:31:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
耗材污染了？
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2楼2008-08-23 19:47:11
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):斑斑捧场，蓬荜生辉。
你用的是什么聚合酶？估计不会是用DNAase处理的聚合酶吧？？
一般来说，聚合酶都是在细菌中生产的，收获聚合酶时大都才用溶菌酶和硫酸铵沉淀法。这样收获的聚合酶中一般都会有菌基因组DNA的污染。一般情况下这些聚合酶中的DNA污染不会影响PCR的，但是字啊某些特殊的情况下，比如引物正好匹配，就有可能会扩增出条带来的。所以如果从水中也可以扩增出条带来，而且还可以排除别的东西污染的话，可以换换引物试试。
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位卑未敢忘忧国。
3楼2008-09-02 10:46:02
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xiexinyao

银虫 (小有名气)

也说说

不知道是不是移液枪给污染了，像吸液的时候不小心把雾化的RNA给吸到里面去了。建议把移液器处理一下看看
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4楼2008-09-05 14:16:04
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