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叶子sunny

新虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR

大家好!我最近在做RT-PCR时遇到一点问题,请各位高手帮忙解决!
     用水和RT产物做模板,均能扩增出300bp左右的片段,而且引物、dNTP、Buffer、水等换过几次,用水做模板的都扩增出和RT产物做模板一样大小的产物。
    谢谢!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

耗材污染了?
2楼2008-08-23 19:47:11
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):斑斑捧场,蓬荜生辉。
你用的是什么聚合酶?估计不会是用DNAase处理的聚合酶吧??
一般来说,聚合酶都是在细菌中生产的,收获聚合酶时大都才用溶菌酶和硫酸铵沉淀法。这样收获的聚合酶中一般都会有菌基因组DNA的污染。一般情况下这些聚合酶中的DNA污染不会影响PCR的,但是字啊某些特殊的情况下,比如引物正好匹配,就有可能会扩增出条带来的。所以如果从水中也可以扩增出条带来,而且还可以排除别的东西污染的话,可以换换引物试试。
位卑未敢忘忧国。
3楼2008-09-02 10:46:02
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xiexinyao

银虫 (小有名气)

也说说

不知道是不是移液枪给污染了,像吸液的时候不小心把雾化的RNA给吸到里面去了。建议把移液器处理一下看看
4楼2008-09-05 14:16:04
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