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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量问题
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pqq226

铜虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量问题

新手一枚，刚做荧光定量几次，绝对定量分析，相关系数R2偏低，扩增效率很高，求人指点怎么回事
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开心最重要
1楼 2015-08-28 12:23:09
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pqq226

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by claire8168 at 2015-08-28 16:07:38
最好把具体的结果贴上来，这样比较好分析。

R2一般<0.97 这个标准曲线就是不可信了，如果是你稀释的标准品，那是不是稀释的时候加样不准确，没有充分混匀，如果是现成的标准品，有没有充分融化混匀后使用。
...

R2一般都会大于0.98，但是扩增效率真的是非常高150%，我用的是TaKaRa试剂盒，引物和探针的设计应该不会有问题，都是参考标准做的，用的是探针法，我是用的质粒做的荧光定量，质粒是自己提的
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开心最重要
3楼2015-08-29 11:00:56
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claire8168

铁虫 (初入文坛)
最好把具体的结果贴上来，这样比较好分析。

R2一般<0.97 这个标准曲线就是不可信了，如果是你稀释的标准品，那是不是稀释的时候加样不准确，没有充分混匀，如果是现成的标准品，有没有充分融化混匀后使用。

扩增效率一般在95%~105%之间都是可以的，约接近100%越好。你的扩增效率具体有多高？ 扩增效率一般反映出的是体系的问题，自配的体系还是试剂盒里配好的buffer？还有不知道你是用的染料法还是探针法，具体的引物和探针的设计是不是有问题？大概能想到这么多。希望能帮到你。
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pqq226
2楼2015-08-28 16:07:38
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