| 查看: 107 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
NcoI和SacI酶切问题
|
|||
为什么切完联不上，难道有什么需要注意的地方？ |
回复此楼» 猜你喜欢
看来今天不会放榜了？
已经有5人回复
-
我面上完蛋了
已经有8人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有25人回复
-
什么时候开奖？
已经有7人回复
-
时间戳又变了
已经有18人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有27人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有16人回复
-
科研孤儿太难了
已经有16人回复
-
应该是下周三26日公布了吧？
已经有4人回复
-
投稿咨询
已经有7人回复
2楼2008-08-22 19:51:29
xiaoyadxy
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1424.5
- 帖子: 137
- 在线: 26小时
- 虫号: 412098
- 注册: 2007-06-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
|
还有很多细节问题也要考虑；比如 1.尽量选择相同的buffer，避免因buffer的不同造成其中一种酶活性很低的问题。需要注意的是，不同公司的限制酶的buffer体系是不相同的，交叉使用是很危险的。 2.保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视可能会大大影响后续酶切的进行。 一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN段上。 NcoI 所需最少的保护碱基数是4 ，SacI 所需最少的保护碱基数是3 。 |
3楼2008-08-23 11:39:56
40