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NcoI和SacI酶切问题
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为什么切完联不上，难道有什么需要注意的地方？ |
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2楼2008-08-22 19:51:29
xiaoyadxy
金虫 (小有名气)
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- 专业: 微生物遗传育种学
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xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
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还有很多细节问题也要考虑；比如 1.尽量选择相同的buffer，避免因buffer的不同造成其中一种酶活性很低的问题。需要注意的是，不同公司的限制酶的buffer体系是不相同的，交叉使用是很危险的。 2.保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视可能会大大影响后续酶切的进行。 一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN段上。 NcoI 所需最少的保护碱基数是4 ，SacI 所需最少的保护碱基数是3 。 |
3楼2008-08-23 11:39:56
