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白色实验服

新虫 (初入文坛)

[求助] 测定土壤酶活力过程中的问题已有3人参与

小弟最近在测定土壤酶活力,常见的几种酶。像蔗糖酶(比色法)、脲酶(苯酚钠-次氯酸钠比色法)、蛋白酶(茚三酮比色法)、纤维素酶(硝基水杨酸比色法)等……
但是,在测定蛋白酶的时候出现一系列问题如下:
1:1、蛋白酶测定的时候,实验组和对照组(无土+无基质)全部出现茶色,并没有出现应该出现的蓝紫色,做了四次,全部都是茶色,不知道哪里出现问题了;
2、用酪素做基质,波长为500nm,用明胶做基质,波长为560nm,请问到底波长用多少合适?
3、培养结束后,过滤之前还是之后加入沉淀蛋白质的试剂,加入后需不需要离心?离心转速多少?离心在过滤之前还是过滤之后好?
4、没有离心,培养后直接过滤,过滤速度很慢(超级慢的那一种),这个现象合理不合理,如果不合理,该怎么做?
5、用酪素做基质,标准曲线用甘氨酸绘制?还是酪氨酸绘制?明胶做基质曲线用什么绘制呢?(查阅了很多文献,方法有的各不相同,希望大神解答……)
我用茚三酮比色法(酪素基质),测定波长为500nm;加勒斯江法(明胶基质),测定波长为560nm;实验还是不出结果,希望虫友帮助,小弟不胜感激……
在测定纤维素酶活力的时候,出现过滤很慢(无法想象的慢,甚至我怀疑过滤都停止了),不知道离心或者用布氏漏斗可以不可以(今天打算试一下的)……或者虫友有更好的解决办法。
第一次发帖,不便之处请见谅。刚签到三天,金币不多……希望大家能帮小弟解决这些问题,在线等。
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实验服穿到报废!
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白色实验服

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 云舒花开 at 2015-08-25 16:41:01
我现在正在做测定蛋白酶活性实验,也遇到了同样的问题,显色是茶色,这两天一直在找问题查资料,不过还没找到原因,求解决办法~

一起讨论、解决问题吧……
实验服穿到报废!
8楼2015-08-25 17:08:36
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白色实验服

新虫 (初入文坛)

没人帮个忙么
实验服穿到报废!
2楼2015-08-25 12:51:38
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我是一粒沙

铜虫 (初入文坛)

不懂楼上的问题,爱莫能助了。想请教一下你的脲酶的测定方法?
3楼2015-08-25 14:04:53
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autumuer

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
今年还没做这些实验,所以不好瞎说。

那个蛋白酶颜色变化的问题可能是PH值没调好。我前几天测有机质的时候也遇到过相似的问题,调了一下PH值就好了。
——仅供参考。
4楼2015-08-25 16:07:45
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