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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切老是切不开
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匿名

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1楼 2015-08-24 17:12:13
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:45:12
hibi: 金币+5 2015-08-31 10:39:33
我一般做20uL体系，在这之前最好测一下你的质粒浓度，这样回收时可以估算到你的浓度，体系是：E1 ,E2各1ul ,buffer 2ul ，质粒一般保证在500ng-1ug之间，最后用水补足20ul，然后37℃酶切3h ,一般效果都很好。希望可以帮你。
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10楼2015-08-25 11:09:54
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mr.clutch

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:44:32
建议测下质粒浓度，做起来才好把握.如果一点也没切开的话，看看是不是buffer用错了或者酶失效了；如果是没切完全的话，有可能是用量和时间的问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-08-25 00:19:53
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人车

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hibi at 2015-08-24 19:53:54
没测浓度   就加了4ul...

这两个内切酶的最优BUFFER是一样的吗？  可能是BUFFER的原因 实在不成就一个一个切
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5楼2015-08-25 08:57:57
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普通回帖

人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你质粒的量是多少？
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2楼2015-08-24 17:46:14
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匿名

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3楼2015-08-24 19:53:54
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6楼2015-08-25 09:02:28
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7楼2015-08-25 09:04:58
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:45:00
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8楼2015-08-25 09:52:45
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9楼2015-08-25 10:45:08
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