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梵天傲

金虫 (小有名气)

[交流] 提取质粒总有切不开的带,为什么……

最近做实验遇到个奇怪的现象,我要用到一个质粒,可是这个质粒小提得到的样品很奇怪,不管用什么酶切,总会有一条5kb至7.5kb左右的带无法切开。但是当用大提的样品时,这条带又不会出现。不知道什么原因,希望有经验的虫子能够帮忙解答下,谢谢!
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梵天傲

金虫 (小有名气)

污染质粒我觉得不太可能吧。
我大提的样品酶切又很正常,只有小提的样品才会这样。
而且小提我既手工提过又用过试剂盒,都是这样的现象。
至于酶切时间以及体系应该也没问题,我试过过夜酶切等,都没用,还是切不开。而且不管用什么酶切都是有一条这样的带。
5楼2008-08-21 20:40:44
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查看全部 7 个回答

yelitao1983

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
从电泳图上看你小提的质粒有两条带,你的酶可能优先选切上面那条带(开环),共价闭环DNA由于空间结构上的紧密性不易被切开!

还有一点可疑的是你小题的质粒带比较奇怪,我们提出来一般是一条带,即便是两条或三条的话,上面的带也不会很亮,你是不是污染了其他质粒了啊
2楼2008-08-21 18:19:59
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
酶切时间是多长?
酶跟buffer是否匹配?酶切的温度要求是37度还是25度?酶的活性怎么样?
有很多因素会影响酶切的完全,这些信息不好判断是否污染。
位卑未敢忘忧国。
4楼2008-08-21 20:31:56
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yelitao1983

银虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你大提的质粒电泳也是和小提一样两条亮度同样的带吗!建议你把小题的两条带分别回收做酶切,看看效果咋样!呵呵
6楼2008-08-22 10:53:57
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