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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提取质粒总有切不开的带，为什么……
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梵天傲

金虫 (小有名气)

[交流] 提取质粒总有切不开的带，为什么……

最近做实验遇到个奇怪的现象，我要用到一个质粒，可是这个质粒小提得到的样品很奇怪，不管用什么酶切，总会有一条5kb至7.5kb左右的带无法切开。但是当用大提的样品时，这条带又不会出现。不知道什么原因，希望有经验的虫子能够帮忙解答下，谢谢！
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1楼 2008-08-21 16:21:30
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
从电泳图上看你小提的质粒有两条带，你的酶可能优先选切上面那条带（开环），共价闭环DNA由于空间结构上的紧密性不易被切开！

还有一点可疑的是你小题的质粒带比较奇怪，我们提出来一般是一条带，即便是两条或三条的话，上面的带也不会很亮，你是不是污染了其他质粒了啊
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2楼2008-08-21 18:19:59
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

怀疑污染
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3楼2008-08-21 18:38:35
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
酶切时间是多长？
酶跟buffer是否匹配？酶切的温度要求是37度还是25度？酶的活性怎么样？
有很多因素会影响酶切的完全，这些信息不好判断是否污染。
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位卑未敢忘忧国。
4楼2008-08-21 20:31:56
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梵天傲

金虫 (小有名气)
污染质粒我觉得不太可能吧。
我大提的样品酶切又很正常，只有小提的样品才会这样。
而且小提我既手工提过又用过试剂盒，都是这样的现象。
至于酶切时间以及体系应该也没问题，我试过过夜酶切等，都没用，还是切不开。而且不管用什么酶切都是有一条这样的带。
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5楼2008-08-21 20:40:44
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你大提的质粒电泳也是和小提一样两条亮度同样的带吗！建议你把小题的两条带分别回收做酶切，看看效果咋样！呵呵
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6楼2008-08-22 10:53:57
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
你大提的质粒电泳也是和小提一样两条亮度同样的带吗！建议你把小题的两条带分别回收做酶切，看看效果咋样！呵呵
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7楼2008-08-22 10:55:13
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