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梁赢

木虫 (正式写手)

[交流] 反相高效液相色谱的洗脱程序

各位大神好!我准备用离子对反相高效液相色谱对核苷酸进行分析,查文献得到的洗脱程序如下:
   100%缓冲液A        5min
   0--77%缓冲液B     27min
   77%缓冲液B          5min
   0--100%缓冲液A   1min
   100%缓冲液B        10min
我第一次做这种洗脱,想请教各位:1.在第2、3步反应中,只有溶液B吗?剩余的一些百分比是水还是溶液A?2. 这种洗脱程序在岛津工作站中如何设定?谢谢各位的指教。。。。。。。。。
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
梁赢: 金币+3 2015-08-23 13:32:23
我个人理解:前5分钟都是100%缓冲液A;5-27min这个过程中,缓冲液B比例从0%到77%,对应的缓冲液A就是100%减去缓冲液B的比例;而后77%的缓冲液B保持5min;后两步的有点看不懂了。
前三步你在岛津上设置的话,默认是泵A,你把缓冲液A放到A泵,缓冲液就可以放到B泵。你的是二元泵还是四元泵?二元泵的话,你选择二元高压梯度洗脱,总流速你设置好就行了。四元泵的话,你也是设置好比例,然后在时间程序里选择B泵的比例,按时间段填写就好。
4楼2015-08-22 23:17:04
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铁拳虎

至尊木虫 (知名作家)

祝楼主万事顺意,心想事成,羊年发大财!
2楼2015-08-22 17:44:32
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梁赢

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-08-22 23:17:04
我个人理解:前5分钟都是100%缓冲液A;5-27min这个过程中,缓冲液B比例从0%到77%,对应的缓冲液A就是100%减去缓冲液B的比例;而后77%的缓冲液B保持5min;后两步的有点看不懂了。
前三步你在岛津上设置的话,默认是 ...

谢谢您的指教,
5楼2015-08-23 13:32:46
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 梁赢 at 2015-08-23 13:32:46
谢谢您的指教,...

不客气,你再仔细看下文献,后两步应该有清楚的说明。
6楼2015-08-23 14:04:00
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