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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 反相高效液相色谱的洗脱程序
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梁赢

木虫 (正式写手)

[交流] 反相高效液相色谱的洗脱程序

各位大神好！我准备用离子对反相高效液相色谱对核苷酸进行分析，查文献得到的洗脱程序如下：
   100%缓冲液A        5min
   0--77%缓冲液B     27min
   77%缓冲液B          5min
   0--100%缓冲液A   1min
   100%缓冲液B        10min
我第一次做这种洗脱，想请教各位：1.在第2、3步反应中，只有溶液B吗？剩余的一些百分比是水还是溶液A？2. 这种洗脱程序在岛津工作站中如何设定？谢谢各位的指教。。。。。。。。。
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1楼 2015-08-22 16:54:50
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
梁赢: 金币+3 2015-08-23 13:32:23
我个人理解：前5分钟都是100%缓冲液A；5-27min这个过程中，缓冲液B比例从0%到77%，对应的缓冲液A就是100%减去缓冲液B的比例；而后77%的缓冲液B保持5min；后两步的有点看不懂了。
前三步你在岛津上设置的话，默认是泵A，你把缓冲液A放到A泵，缓冲液就可以放到B泵。你的是二元泵还是四元泵？二元泵的话，你选择二元高压梯度洗脱，总流速你设置好就行了。四元泵的话，你也是设置好比例，然后在时间程序里选择B泵的比例，按时间段填写就好。
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4楼2015-08-22 23:17:04
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铁拳虎

至尊木虫 (知名作家)
祝楼主万事顺意，心想事成，羊年发大财！
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2楼2015-08-22 17:44:32
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梁赢

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-08-22 23:17:04
我个人理解：前5分钟都是100%缓冲液A；5-27min这个过程中，缓冲液B比例从0%到77%，对应的缓冲液A就是100%减去缓冲液B的比例；而后77%的缓冲液B保持5min；后两步的有点看不懂了。
前三步你在岛津上设置的话，默认是 ...

谢谢您的指教，
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5楼2015-08-23 13:32:46
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 梁赢 at 2015-08-23 13:32:46
谢谢您的指教，...

不客气，你再仔细看下文献，后两步应该有清楚的说明。
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6楼2015-08-23 14:04:00
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