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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请各位高手帮忙看一看，如何改进PCR条件，谢谢啦！
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)

[求助] 请各位高手帮忙看一看，如何改进PCR条件，谢谢啦！ 已有2人参与

下面图片的反应条件是：95℃10min,94℃45s,55℃45s,72℃45s,最后72℃10min。我不同的引物对应的样本都是一样的。用的20ul体系，MIX-10ul，水-7ul,前后引物各0.5ul,DNA-2ul。我用的DNA浓度都是90~100多的，稀释了10倍。MARKER是D2000.跑出来的结果感觉很模糊，太朦胧了，也太亮了。那位高手有跑的比较好的让我做个参照吗？求各位高手帮忙分析一下如何改进，谢谢啦！

请各位高手帮忙看一看，如何改进PCR条件，谢谢啦！
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请各位高手帮忙看一看，如何改进PCR条件，谢谢啦！-1
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请各位高手帮忙看一看，如何改进PCR条件，谢谢啦！-2
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1楼 2015-08-22 11:15:16
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helios_hj

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、你的目的扩增片段在100bp+或200bp+的话，建议凝胶配置在2%
2、marker换成DL2000试试
3、用凝胶成像仪拍照时，焦距再调整下
赞一下 回复此楼
Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
3楼2015-08-23 10:57:32
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mengzhuan319

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:05:42
建议体系中的DNA 量减少，并做个梯度比如0.5ul.  1.0ul 2.0ul,其余体积用水补足
赞一下 回复此楼
HIV检测试剂盒研发、细胞培养
2楼2015-08-22 22:04:25
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