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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 双向电泳求助，各位大侠帮小妹分析一下吧
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安安刘轩儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 双向电泳求助，各位大侠帮小妹分析一下吧 已有2人参与

各位大侠，我是做酶液双向分析的，菌液超滤浓缩除盐后，用50mM的醋酸钠缓冲液溶解后，直接上双向 :
   125uL体系：100ug蛋白量+2ul bio-lyte. 主动水化：50v,16度，16h. 胶条清洗后，跑第一向：50V 30min; 100v 30min; 250v 1h; 500v 2h; 1000v 2h; 4000v 3h; 4000v 22000vh; 500v 99h.
先跑了7cm 3-10的胶条，然后又跑4-7的胶条。结果一直不好，横条太明显。请大家帮我分析一下，应该怎么做呢？谢谢啦

双向电泳求助，各位大侠帮小妹分析一下吧
IMG_8297.JPG
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1楼 2015-08-21 17:15:25
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
现在都很少用2d电泳了  都是做ITRAQ技术
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生命还需要奇迹来衬托
2楼2015-08-25 10:36:53
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安安刘轩儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小逍遥人 at 2015-08-25 10:36:53
现在都很少用2d电泳了  都是做ITRAQ技术

是的。但是一直再做，想再试一下
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3楼2015-08-28 09:07:58
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lini-828127

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是样品的问题吧，是不是样品含盐量太高了
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4楼2015-08-28 11:28:47
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安安刘轩儿 at 2015-08-28 09:07:58
是的。但是一直再做，想再试一下...

你可以找辉骏生物，他们做得挺好的
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生命还需要奇迹来衬托
5楼2015-08-31 10:32:53
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是蛋白没提好，含盐较高，你可以加个除盐步骤

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6楼2015-08-31 10:36:35
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安安刘轩儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lini-828127 at 2015-08-28 11:28:47
是样品的问题吧，是不是样品含盐量太高了

我重新丙酮沉淀过后，依然会有出现这个现象。我的事胞外的酶液，做给很多次，一直都有横条纹。
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7楼2015-08-31 16:05:33
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lini-828127

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 安安刘轩儿 at 2015-08-31 16:05:33
我重新丙酮沉淀过后，依然会有出现这个现象。我的事胞外的酶液，做给很多次，一直都有横条纹。...

你做的是什么样品?

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8楼2015-08-31 23:26:51
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 安安刘轩儿 at 2015-08-31 16:05:33
我重新丙酮沉淀过后，依然会有出现这个现象。我的事胞外的酶液，做给很多次，一直都有横条纹。...

你可以用甲醇洗，静置一个小时后离心，再用含巯基乙醇的丙酮洗两次，中间也静置一个小时后离心

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9楼2015-09-01 00:25:24
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纳米材料雪

新虫 (初入文坛)
请问50mM醋酸钠溶液怎么配的啊？是ph5的吗？

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10楼2018-04-19 15:15:17
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