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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞复苏
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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细胞复苏 已有10人参与

我的细胞复苏后，状态一直不好，感觉大小不一致，中间的核比较大，颜色偏深，而且贴壁较慢，铺展很开。
最近查了下复苏的步骤，有说复苏后转到离心管，最好迅速离心，减少DMSO对细胞的毒性；也有说细胞从冻存管转到15ml离心管之后，要逐滴加入培养基，时间不少于2min，使细胞慢慢适应。
请教各位大牛，到底细胞复苏后（快融之后）加一定量培养基时要快点，还是慢点？而且加多少培养基，再离心比较合适？
谢谢
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1楼 2015-08-20 11:09:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.细胞复苏后加3-5倍体积的培养基,可以起到稀释DMSO的作用，之后培养约24下时候，大部分细胞贴壁后，弃掉旧培养基，加入新的培养基。
2.刚复苏的细胞尽量不要离心。细胞刚复苏，状态肯定不好，离心会对细胞造成伤害，所以尽量避免刚复苏就离心。
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3楼2015-08-20 12:40:30
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普通回帖

昔我往兮

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lynn111666: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-08-23 13:04:23
细胞复苏，复苏效果和细胞种类有关，其次，复苏次日应及时换新培养基，另外，复苏速融后应快速加入一般10倍体积的培养基，避免DMSO在较高温度下对细胞的毒害，离心后换新培养基接种！

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2楼2015-08-20 11:22:03
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fotony

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞的复苏应该是快速的，而且复苏也和细胞的种类有关，复苏后可以将其加入20ml的PBS进行离心，离心之后按照相应的接种比例进行接种培养！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-08-20 14:26:04
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们是这样做的，快速解冻细胞，然后立马加入培养基，600转左右离心，然后再加比平时多两到三倍的培养基进行培养，放到培养箱后就别动了，等24小时贴壁后观察，换液
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医学&统计学
5楼2015-08-20 16:34:55
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muchong.X

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
复苏时细胞一定要37度快速摇，大约3min内可以融化，迅速置于培养基中，200G左右离心即可。或者融化后直接离心，然后直接加上培养基培养，24小时内换液。一般第一种方法比较常见。其实，细胞复苏过程对细胞影响不大。你的细胞是什么细胞?是不是你的冻存有问题？对于比较脆弱的细胞，加血清多点比较好。
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6楼2015-08-20 18:22:38
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阿喵110

铁虫 (初入文坛)
细胞复苏要迅速，一般加10倍左右培养基，轻轻吹打清洗，再用1200转离心，弃去上清液，再加入新的培养基，然后培养24小时观察，换液。
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7楼2015-08-20 19:44:27
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vita198861

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
复苏迅速，水温可以在38度。控制一分钟内，不要超过两分钟。在水中轻轻晃动。复苏后不要离心，加10mL培养基，我一般两小时后换液，不要超过12小时。个人经验两小时不贴壁的12小时也不会贴的了。不排除有贴壁很慢的细胞我没见过。
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8楼2015-08-20 20:24:39
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奋斗的小行者

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是冻存管取出来后你复溶时间长了，最好1分钟复溶，然后转入到加有培养基的离心管离心

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9楼2015-08-20 20:36:29
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RodinYang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
离心复苏和非离心复苏我都用过，好像差别不大。直接加10倍培养基，4小时后换新的培养基。尽量在1分钟内，快速摇动使其融化

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10楼2015-08-20 20:38:07
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