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lynn111666

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细胞复苏已有10人参与

我的细胞复苏后,状态一直不好,感觉大小不一致,中间的核比较大,颜色偏深,而且贴壁较慢,铺展很开。
最近查了下复苏的步骤,有说复苏后转到离心管,最好迅速离心,减少DMSO对细胞的毒性;也有说细胞从冻存管转到15ml离心管之后,要逐滴加入培养基,时间不少于2min,使细胞慢慢适应。
请教各位大牛,到底细胞复苏后(快融之后)加一定量培养基时要快点,还是慢点?而且加多少培养基,再离心比较合适?
谢谢
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673643401

铁虫 (小有名气)

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1.细胞复苏后加3-5倍体积的培养基,可以起到稀释DMSO的作用,之后培养约24下时候,大部分细胞贴壁后,弃掉旧培养基,加入新的培养基。
2.刚复苏的细胞尽量不要离心。细胞刚复苏,状态肯定不好,离心会对细胞造成伤害,所以尽量避免刚复苏就离心。
3楼2015-08-20 12:40:30
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普通回帖

昔我往兮

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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lynn111666: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-08-23 13:04:23
细胞复苏,复苏效果和细胞种类有关,其次,复苏次日应及时换新培养基,另外,复苏速融后应快速加入一般10倍体积的培养基,避免DMSO在较高温度下对细胞的毒害,离心后换新培养基接种!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-20 11:22:03
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fotony

金虫 (小有名气)

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细胞的复苏应该是快速的,而且复苏也和细胞的种类有关,复苏后可以将其加入20ml的PBS进行离心,离心之后按照相应的接种比例进行接种培养!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-08-20 14:26:04
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董博士

金虫 (正式写手)

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我们是这样做的,快速解冻细胞,然后立马加入培养基,600转左右离心,然后再加比平时多两到三倍的培养基进行培养,放到培养箱后就别动了,等24小时贴壁后观察,换液
医学&统计学
5楼2015-08-20 16:34:55
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muchong.X

银虫 (小有名气)

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复苏时细胞一定要37度快速摇,大约3min内可以融化,迅速置于培养基中,200G左右离心即可。或者融化后直接离心,然后直接加上培养基培养,24小时内换液。一般第一种方法比较常见。其实,细胞复苏过程对细胞影响不大。你的细胞是什么细胞?是不是你的冻存有问题?对于比较脆弱的细胞,加血清多点比较好。
6楼2015-08-20 18:22:38
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阿喵110

铁虫 (初入文坛)

细胞复苏要迅速,一般加10倍左右培养基,轻轻吹打清洗,再用1200转离心,弃去上清液,再加入新的培养基,然后培养24小时观察,换液。
7楼2015-08-20 19:44:27
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vita198861

铁虫 (正式写手)

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复苏迅速,水温可以在38度。控制一分钟内,不要超过两分钟。在水中轻轻晃动。复苏后不要离心,加10mL培养基,我一般两小时后换液,不要超过12小时。个人经验两小时不贴壁的12小时也不会贴的了。不排除有贴壁很慢的细胞我没见过。
8楼2015-08-20 20:24:39
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奋斗的小行者

新虫 (小有名气)

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是不是冻存管取出来后你复溶时间长了,最好1分钟复溶,然后转入到加有培养基的离心管离心

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9楼2015-08-20 20:36:29
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RodinYang

新虫 (正式写手)

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离心复苏和非离心复苏我都用过,好像差别不大。直接加10倍培养基,4小时后换新的培养基。尽量在1分钟内,快速摇动使其融化

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10楼2015-08-20 20:38:07
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