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beiw

银虫 (初入文坛)

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[求助] 求PixFRET插件及使用方法顺便求助下confocal做FRET的技巧

求PixFRET的插件，可以应用于Image J上。顺便求个使用攻略，第一次做，不太会用这个软件及插件。

PS：1、最近用confocal作FRET样品，用Leica TCS SP5，用的是LAS AF，非序列扫描，只是设置了多个PMT通道，总是有串色。比如某个样品设置没有第三通道的荧光，但是在扫描时依然有荧光出现。求问是否一定要用LAS FRET SE这个方式不用LAS AF这个方式做样品，还是说用LAS AF，但是用序列扫描来避免串色？
   2、此外是否一定要像文献中说的先做单donor，再做单acceptor荧光，然后调节acceptor荧光最低（不太懂这一步，求指教），然后做FRET信号？
   3、做FRET时不同通道 PMT检测范围是否应该更窄些？还是说选择软件已有的荧光基团就好？
   不知有没有人懂这方面，非常急，在线等！

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