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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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骑小强追秋香

金虫 (初入文坛)

[交流] ISSR-PCR扩增不出条带

我现在实验是做植物的ISSR,筛选过引物和退火温度是可以扩增的,但是突然就不能扩增了,条件什么的都没改变,PCR仪也换过了,都不能扩增。
PCR反应体系为25微升。
DEPC水 18.67微升,
10×buffer 2.5微升,
dNTP 1.0微升(2.5微mol/L),
Taq酶 0.83微升(2U/L),
模板的浓度我现在用5.0ng 10ng 20ng 30ng 40ng 50ng都不能扩增
引物是上个月从上海生工定的,回来稀释过之后只用了半个月,其他试剂都是新开的。
PCR条件是 96℃预变性 5 min,94C变性 30S,退火48C -56C 1min,72~C 2min,
35个循环;72C 10 min,4C终止反应。
请问是什么原因啊?还有几个月就要毕业了,急啊!!!
附件是总DNA的图和PCR扩增结果
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eesing

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 骑小强追秋香 at 2008-08-21 08:37:22:
怎么没有人回复啊,高手请进

顶一下,同样的问题。你的dna质量高吗?希望有高手来
3楼2011-08-17 07:49:06
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骑小强追秋香

金虫 (初入文坛)

怎么没有人回复啊,高手请进
2楼2008-08-21 08:37:22
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