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ISSR-PCR扩增不出条带
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我现在实验是做植物的ISSR，筛选过引物和退火温度是可以扩增的，但是突然就不能扩增了，条件什么的都没改变，PCR仪也换过了，都不能扩增。 PCR反应体系为25微升。 DEPC水 18.67微升， 10×buffer 2.5微升， dNTP 1.0微升(2.5微mol/L)， Taq酶 0.83微升（2U/L）， 模板的浓度我现在用5.0ng 10ng 20ng 30ng 40ng 50ng都不能扩增 引物是上个月从上海生工定的，回来稀释过之后只用了半个月，其他试剂都是新开的。 PCR条件是 96℃预变性 5 min，94C变性 30S，退火48C -56C 1min，72~C 2min， 35个循环；72C 10 min，4C终止反应。 请问是什么原因啊？还有几个月就要毕业了，急啊！！！ 附件是总DNA的图和PCR扩增结果 |
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