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ruier8873

木虫 (小有名气)

大傻

[求助] 有关分离度问题 已有6人参与

我在摸索方法的时候,样品与杂质的分离度可以达到2.0,然后在进行方法学验证的时候,做了几天分离度都能达到要求,但是在做耐用性的时候,做对照样品,也就是正常样品的时候分离度就只有1.7左右,做耐用性条件都不合格。然后冲柱子再做正常条件,分离度就不合格,我想知道这个是方法问题还是柱子的问题?怎么解决?
注:杂质在分不开的情况下,理论塔板数降低了很多。
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菜鸟一枚,大家多多关照。希望自己能活的糊涂一点
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
12楼: Originally posted by ruier8873 at 2015-08-11 15:13:12
用70水:乙腈 按10%的梯度往上加,直到100乙腈,然后用甲醇冲的。

您是建议怎么冲洗呢?请指点一下...

高水相的时候,冲洗的时间长吗?主要是磷酸盐,用高水相把它冲出来。然后乙腈的话,加到95就行了,用95%乙腈冲就不再用甲醇了。100%乙腈容易造成单向阀里面的宝石球吸上去
17楼2015-08-11 17:21:55
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longyi706565

金虫 (正式写手)

可能是柱子的问题,方便的话,把前后色谱图看看
2楼2015-08-11 13:46:50
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xiaoguaijing

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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流动相是什么?色谱条件?
3楼2015-08-11 13:58:56
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
柱效下降,造成分离度降低,你把柱子好好冲一下,然后再试试看。
4楼2015-08-11 14:00:24
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